Standardization of conditions for PCR detection of Leishmaniaspp. DNA in sand flies (Diptera, Psychodidae)

A correta identifica????o dos agentes etiol??gicos em insetos vetores ?? de crucial import??ncia aos estudos epidemiol??gicos. A pesquisa de flagelado nesses vetores, pela dissec????o de seu trato digestivo, observa????o microsc??pica do seu conte??do ou por isolamento dos parasitas provenientes de insetos em meios de cultura, tem-se mostrado operacionalmente inadequada e com baixa especificidade do diagn??stico, pois f??meas de flebotom??neos tamb??m podem albergar outros flagelados como Trypanosoma e Endotrypanum. Acreditamos que por sua efici??ncia e especificidade, a amplifica????o de seq????ncias-alvo do DNA da Leishmania, por meio da rea????o em cadeia de polimerase, pode ser aplicada na investiga????o de sua presen??a em flebotom??neos, desde que estes estejam devidamente acondicionados e o DNA do parasita extra??do a partir de metodologia adequada. Este trabalho descreve metodologias utilizadas na padroniza????o da conserva????o dos esp??cimes de flebotom??neos e extra????o do DNA da Leishmania como uma alternativa mais pr??tica que os m??todos tradicionais.The correct identification of etiological agents in vector insects is crucial for epidemiological studies. Identification of flagellates in such vec-tors, usually by dissection of the digestive tract and microscopic observation of the contents as well as attempts at parasite isolation from in-sects in culture media, have proven operation-ally inadequate and with poor diagnostic speci-ficity, since female sand flies are also hosts for other flagellates like Trypanosomaand Endo-trypanum. Due to the efficiency and specificity of DNA target sequence amplification by poly-merase chain reaction (PCR), the latter could be used to investigate the presence of Leishmaniain sand flies, although the insects need to be prop-erly stored and the Leishmania DNA extracted using appropriate methodology. This paper de-scribes methodologies to standardize sand fly storage and Leishmania DNA extraction in such specimens as a more practical method in field studies