Papel da exposi????o de fosfatidilserina em isolados de Leishmcmia amazunensis obtidos de pacientes de leishmaniose cut??nea difusa na modula????o da infec????o de macr??fago

A Leishmaniose Cut??nea Difusa (LCD) ?? uma manifesta????o cl??nica rara das Leishmanioses, caracterizada pela presen??a de in??meros macr??fagos intensamente parasitados e baixa rea????o inflamatoria. No Brasil, a esp??cie envolvida em casos de LCD ?? a Leishmania (Leishmania) amazonensis. Tem sido descrito na literatura a exposi????o e o reconhecimento de fosfatid??lserina (PS) na superf??cie de c??lulas apopt??ticas fagocitadas por macr??fagos como mecanismo de desativa????o de macr??fagos por urna via dependente de TGF-pi e PGE2 (Fadok et al. 1998). Foi demonstrado por Barcinski e colaboradores que formas amastigotas de L. amazonensis exp??em PS em sua superf??cie, em um mecanismo chamado ???Mimetismo Apopt??tico???. Nesse contexto, nosso objetivo foi investigar a exposi????o de PS na superf??cie de isolados de L, amazonensis obtidos de pacientes com LCD e seu papel durante a infec????o de macr??fagos. Inicialmente, macr??fagos peritoneais de camundongos Fl(BALB/c x C57BL/6) estimulados com tioglicolato foram infectados com os diferentes isolados obtidos de pacientes com Leishmaniose Cut??nea Localizada (LCL) e LCD. A exposi????o de PS na superf??cie das amastigotas purificadas de macr??fagos F1 foi determinada por citometria de fluxo. Os isolados obtidos de pacientes com LCD apresentaram maior express??o de PS do que os isolados de pacientes com LCL ap??s 24 horas de infec????o. Em seguida, avaliamos se a diferen??a observada na exposi????o de PS em amastigotas estaria relacionada ?? infectividade dos diferentes isolados. Os resultados indicaram que as amastigotas de pacientes com LCD apresentaram maior porcentagem de macr??fagos infectados e ??ndice de infec????o, quando comparados com amastigotas de pacientes com LCL. Quanto ao mecanismo, 0 grupo infectado com os isolados de pacientes com LCD n??o apresentou diferen??a em rela????o ao grupo LCL quanto a produ????o de TGF-pl e ??xido n??trico, sugerindo que outros mecanismos imunorregulat??rios estejam envolvidos. Os resultados em conjunto, sugerem que 0 aumento na exposi????o de PS nos isolados de L. amazonensis de pacientes com a forma difusa pode representar um mecanismo de adapta????o importante para a sobreviv??ncia e estabelecimento da infec????o. A elucida????o de mecanismos supressores da LCD induzidos por isolados de L. amazonensis poder?? ampliar 0 conhecimento sobre a imunorregula????o dessa patologiaDiffuse Cutaneous Leishmaniasis (LCD) is a rare clinical manifestation of Leishmaniasis, characterized by a number of macrophages heavily parasitized and low inflammatory reaction. In Brazil, Leishmania (Leishmania) amazonensis is the main specie involved in LCD cases. It has been described that the exposure and recognition of phosphatidylserine (PS) on the surface of apoptotic cells phagocytosed by macrophages is a macrophage deactivation mechanism dependent on TGF-pi and PGE2 (Fadok et al. 1998). Morover, it was demonstrated by Barcinski and colleagues that L. amazonensis amastigotes expose PS on its surface, in a mechanism called ??????Apoptotic Mimicry." In this context, our goal was to investigate the exposure of PS on the surface of L. amazonensis isolates obtained from LCD patients and its role during the infection of macrophages. Initially, peritoneal macrophages from FI mice (BALB/c x C57BL/6) stimulated with thioglycolate were infected with different L. amazonensis strains isolated from patients with Localized Cutaneous Leishmaniasis (LCL) or LCD. The exposure of PS on the surface of amastigotes was determined by flow cytometry using staining to annexin V and propidium iodide. Isolates from LCD patients showed higher PS exposure than the isolates from LCL patients 24 hours after infection. Then, we evaluated whether the differences of PS exposure in amastigotes would correlate with the infectivity of different isolates. Percentage of infected macrophages and infection index were higher in cultures using amastigotes from LCD patients compared to the ones infected with amastigotes from LCL cases. Furthermore, cultures infected with LCD isolates showed no difference to the LCL isolates regarding TGF>pl and nitric oxide production, suggesting that other immuneregulatory mechanisms are involved in this process. These results suggest that the increased exposure of PS in L. amazonensis isolates from patients with diffuse form may represent an important mechanism for the establishment of infection. The elucidation of the LCD suppressing mechanisms induced by L. amazonensis strains may expand the knowledge about the immune regulation of this diseas