Standardization and evaluation of the technique of electrophoresis in pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) for molecular typing of Yersinia pestis Celpa isolated in northeastern Brazil

A Yersinia pestis ?? o agente causador da peste, doen??a infecciosa transmitida atrav??s da picada de pulgas infectadas. O homem se contamina acidentalmente ao entrar em contato com roedores ou outros animais infectados (raposas, c??es e gatos) e suas pulgas. A Y. pestis ?? uma esp??cie muito homog??nea, fenotipicamente, apresentando um sorotipo, um fagotipo e tr??s biotipos. Diferentes m??todos moleculares foram utilizados em estudos epidemiol??gicos para discriminar cepas bacterianas. No entanto, para Y. pestis isoladas em focos do Nordeste do Brasil, a maioria dos marcadores estudados n??o conseguiram discriminar as cepas originadas de diferentes hospedeiros, per??odos e locais de isolamento. A eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) ?? caracterizada pela separa????o de fragmentos de DNA obtidos por digest??o dos cromossomos com endonucleases de restri????o. Essa t??cnica ?? considerada o padr??o ouro dos m??todos de tipagem molecular, sendo altamente discriminat??ria e v??lida para muitos pat??genos bacterianos, inclusive Y. pestis de outros focos do mundo. O objetivo deste trabalho foi realizar tipagem molecular de cepas brasileiras de Y. pestis atrav??s do PFGE. Das 43 cepas de Y. pestis, 36 foram usadas para padroniza????o da t??cnica e 22 cepas, obtidas antes e durante um surto de peste ocorrido no Estado da Para??ba, para avalia????o do PFGE. De acordo com padr??es encontrados com a endonuclease de restri????o AscI, 19 perfis foram gerados. Esses gen??tipos foram enquadrados em oito grupos (A-H) geneticamente relacionados. A t??cnica do PFGE mostrou se capaz de diferenciar as cepas de Y. pestis obtidas em diferentes munic??pios, antes e durante o surto de peste. De acordo com a variabilidade dos padr??es de restri????o e o alto poder discriminat??rio, a t??cnica PFGE pode ser utilizada para diferencia????o e an??lise de novos isolados. A padroniza????o do protocolo do PFGE para genotipagem das cepas brasileiras de Y. pestis pode ser ??til na compreens??o e controle da expans??o da pest