MicroRNAS associados a copy number variation em câncer colorretal

O Câncer colorretal (CCR) é uma doença que acomete o cólon e o reto. Ele surge a partir de polipos que podem progredir para adenocarcinomas, que surgem de maneira esporádica ou herdada. É o terceiro tipo de câncer mais comum no mundo, atingindo 8% dos cânceres no Brasil. Vários mecanismos moleculares como mutações, Variação do Número de Cópias (CNVs) e ação de RNAs não-codificantes (miRNAs) já foram descritos em CCR. Os miRNAs (RNAs com função de regular a expressão gênica por meio da clivagem ou inibição da tradução de mRNAs-alvo) e as CNVs (sequências repetitivas de DNA resultantes de deleções e duplicações) possuem grande importância na regulação do crescimento celular, diferenciação, proliferação e apoptose. Muitas vezes as sequências codificadoras para miRNAs podem estar contidas em regiões de CNVs, e sua expressão diferencial no câncer pode acontecer em consequência da variação em número de cópias. Neste contexto, objetivo deste trabalho foi associar a expressão diferencial de miRNAs com a variação no número de cópias e correlacioná-los com características clínicas de indivíduos com CCR. Para o mesmo, 10 miRNAs diferencialmente expressos e localizados contidos em regiões de CNV em CCR foram selecionados. Um total de 31 pacientes, cada um com amostra de tecido normal, tumoral e linfonodal foram analisados. Foi demonstrado que os miRNAs miR570, miR338-3-p, Let7g, miR1, miR150, miR183, miR650 e miR31 possuíam perfil de expressão diferencial e significância estatística em todos os pacientes analisados. Um aumento do número de cópias para a CNV-miR570 e a CNV-miR650 foi validado nas amostras tumorais em relação ao normal. O teste de Mantel-cox, conjuntamente com Kaplan-meier, associou menor taxa de sobrevida para indivíduos com genótipo diploide para a CNV relacionada ao miR150. Por fim, uma correlação não-paramétrica para avaliar a ligação entre a variação de número de cópias e níveis de expressão de miRNAs foi feita. Apenas para um miRNA (miR16 na amostra tumoral) essa correlação foi significativa, o que indica que para essas amostras o CNV provavelmente não influencia a expressão gênica de miRNAs relacionados ao desenvolvimento de CCR. Esse estudo é essencial para a elucidação dos mecanismos que levam ao desenvolvimento do CCR, a fim de descobrir novos marcadores moleculares e mecanismos que ajudem na compreensão da tumorigênese, o que colabora para melhores diagnósticos e prognósticos.Colorectal cancer (CRC) is a disease that affects colon and rectum. It arises from polyps that become adenocarcinomas, which happens sporadically or inheritedly. It is the third most common cancer worldwide, reaching 8% of cancers in Brazil. Several molecular mechanisms such as mutations, Copy Number Variation (CNV) and miRNAs expression have been described in CRC. MiRNA molecules (non-coding RNA regulating gene expression by inhibiting translation or cleavage of target mRNAs) and CNV (small repetitive DNA sequences resulting from deletions, duplications, translocations, inversions and insertions) have great importance in the regulation of cell growth, differentiation, proliferation and apoptosis. MiRNAs and CNVs are associated with various types of cancer, and have differential expression in tumor tissues. Often miRNAs coding sequences may be attached to regions of CNVs and their differential expression in cancer may be due to its variation in copy number. In this context, this work aims to verify the presence of copy number variation by influencing differential expression of miRNAs associated with CRC and correlate clinical features. We selected 10 CRC differentially expressed miRNAs that where attached to CNV regions. miRNA expression and Copy Number Variation of 31 patients was made by qPCR, using normal, tumor and lymphnode tissue samples. Relative quantitation of miRNAs was made by ddCq and quantification of copy number was made by CopyCaller software. The t-test significance for tumor and lymphnode showed miR570, miR338, Let7, miR1, miR150, miR183, miR650 and miR31 as differentially expressed. Significance comparison Wilcoxon test between normal and cancerous samples has shown that CNV-miR570 and CNV-miR650 are diferencially expressed compared to normal CNVs. The Mantel-Cox test, along with Kaplan-meier, showed CNV-miR150 diploid genotype CNV associated with lower survival rates. Finally, a non-parametric correlation acessed whether there is a link between variation in copy number and expression levels of miRNAs. In about only one CNV-miRNA (CNV-miR16 in tumor sample), the correlation was significant, which indicates that in these samples CNV probably does not influence gene dosage of miRNAs related to CRC development