Caracterização de proteínas em tecido mioepitelial e líquido de defesa de Aplysia dactylomela

O ecossistema marinho faz parte do maior sistema aquático do planeta. Desde a antiguidade o homem tem realizado estudos a respeito da biodiversidade marinha e em posse desse conhecimento busca desenvolver produtos biotecnológicos e compreender o seu funcionamento. Dentro do grupo dos invertebrados, o filo Mollusca é o maior filo em questão de indivíduos depois do grupo dos artropódes, com mais de 50 000 espécies conhecidas com formas de vida e morfologia bem diversificadas. Moluscos e demais invertebrados não possuem anticorpos e são bastante dependentes da imunidade inata. Diante desse fator, o molusco Aplysia dactylomela foi escolhido para avaliação e caracterização dos mecanismos de defesa presentes no mioepitelio e líquido de defesa produzido por esse molusco. Para tal, foram utilizados processos cromatográficos de exclusão molecular e fase reversa com foco na caracterização protéica. Essas técnicas se mostraram eficientes para a análise e purificação de moléculas presentes em uma amostra complexa. Foram identificadas as proteínas actina, paramiosina, tropomiosina, filamina e calponina na amostra de mioepitelio. Essas proteínas estão envolvidas no processo de contração muscular, mas também desempenham papéis de mediadores de algumas reações do sistema imune. Em relação ao líquido de defesa, sua composição protéica não é bem definida na literatura. Diversos artigos relatam a presença de uma proteína de 60 kDa que possui atividade contra vírus, bactérias e células tumorais. Entretanto o presente estudo demonstra uma maior diversidade de proteínas e peptídeos ainda não descritos. Para a análise desta amostra também foram utilizadas as técnicas de cromatografia de exclusão molecular e fase reversa. Uma proteína de 13 kDa pôde ser purificada utilizando tais processos. Os dados obtidos neste estudo representam uma primeira tentativa de complementar os trabalhos a respeito dos mecanismos moleculares de defesa presente no molusco A. dactylomela.The marine ecosystem is the largest aquatic system on the planet. Thus, men have searched for a better understanding of the marine environment since early civilizations. The Moluscas phylum is the largest phylum after the Arthropodas phylum. More than 50,000 species are known with different ways of life and diverse morphologies. The Gastropoda class is the most common and varied marine life among molluscs. Invertebrates are highly dependent on innate immunity to defend themselves against pathogenic microorganisms. Considering this factor, the mollusk Aplysia dactylomela was chosen for the evaluation and characterization of possible protein related defense mechanisms. The protein content of the epithelial tissue and ink produced by the defense mollusk is characterized in this study. To purify these proteins and peptides size exclusion and reverse phase chromatography techniqueswere used. Both methods have been proven successful to analyze and purify molecules present in this complex sample. Actin, tropomyosin, paramyosin, filamin and calponin were identified in the skin sample. These proteins are involved in muscle contraction processes, but also play key roles asimmune system mediators. In relation to the ink defense, the protein composition is not well characterized in the literature. Several articles have been reported a 60 kDa protein that has biological activity against viruses, bacteria and tumor cells. However, the present study shows that there are other proteins and peptides that havent been described in the literature. To evaluate this sample, techniques such as size exclusion and reverse-phase chromatography were also employed. A 13 kDa protein was successfully purified using this protocol. These data allow for a better comprehension about the physiological and defense mechanisms present in the mollusk A. dactylomela