Diversidade de isolados brasileiros de Ralstonia solanacearum da biovar 2

A bactéria de solo Ralstonia solanacearum (Rs), responsável pela murcha bacteriana em diversas espécies hospedeiras, é um complexo específico devido à sua diversidade genética. Historicamente, Rs tem sido classificada em biovares, baseado na utilização de açúcares e álcoois como fonte de carbono, e em raças, baseado na capacidade de infectar diferencialmente espécies hospedeiras. Esses sistemas de classificação, entretanto, não são adequados para explicar toda a variabilidade deste patógeno. Por isso, Fegan e Prior (2005) propuseram uma nova classificação em filotipos com base na região ITS (Intergenic Transcribed Sequence) entre os genes de RNA ribossomal 16S e 23S e sequevares baseados na sequência do gene da enzima endoglucanase. As recentes pesquisas indicam que o filotipo I foi originado na Ásia, o filotipo II nas Américas, o filotipo III originado na África e filotipo IV na Indonésia. Neste trabalho, foram analisados 60 isolados brasileiros de Ralstonia solanacearum de procedência geográfica variada, a maioria deles associados à cultura da batata. Todos os isolados, pertencentes à coleção da Embrapa-Hortaliças, foram confirmados como pertencentes ao complexo específico Ralstonia solanacearum por meio de PCR com primers universais e posteriormente foram confirmados como sendo pertencentes à biovar 2. A classificação em filotipos, realizada por meio de uma PCR multiplex, indicou que todos os isolados apresentaram fragmento amplificado correspondente ao filotipo II, com exceção de um isolado, obtido de pimentão em Brasília (filotipo IV). Esses resultados corroboram a expectativa da prevalência do filotipo II nas Américas. Sequenciamento e análise do gene endoglucanase (egl), mostrou que eles pertencem à sequevar 1 e 5 e que a variação entre linhagens de uma mesma região é baixa. Resultados de fingerprint de Box- PCR indicam que os isolados brasileiros são agrupados por região onde foram isolados e época de sua ocorrência.The soil bacterium Ralstonia solanacearum (Rs), responsible for bacterial wilt in different hosts, is a species complex because of its genetic diversity. Historically, Rs has been classified into biovars based on the use of sugar and alcohol as carbon source, and races based on its ability to infect different hosts. These classification systems are not enough to portray all the variability of this pathogen. Therefore, Prior and Fegan (2005) proposed a new classification of phylotypes based on the ITS (Intergenic Transcribed Sequence) of the ribosomal RNA genes 16S and 23S and of sequevar based on the endoglucanase gene sequence. We have studied 60 Brazilian strains of Rs from diverse geographical origins by traditional as well as molecular methods. All strains were confirmed as belonging to specific complex Ralstonia solanacearum by PCR with universal primers. All strains were also identified as biovar 2. The characterization into phylotypes by a multiplex PCR indicated that all strains belong to the phylotype II group, except for one strain, obtained from pepper in Brasilia that showed an amplified fragment characteristic of phylotype IV. These results confirm the expectation of prevalence of phylotype II in the Americas. Sequencing and analysis of the endoglucanase gene (egl) showed that the strains studied belong to sequevars 1 and 5 and the variation among strains of the same region is low. Analysis of fingerprint results from Box-PCR indicates that the Brazilian isolates are grouped by the geographical region in which were isolated as well as the time of its occurrence