AvaliaÃÃo dos Efeitos da InfecÃÃo pela Escherichia coli enteroagregativa (CEPA 239-1) na evoluÃÃo clonal e resposta prÃ-inflamatÃria de cÃlulas intestinais in vitro e sua modulaÃÃo com alanil-glutamina

A morte por diarreia aguda tem apresentado grande declÃnio desde a dÃcada de 80 em todas as regiÃes do mundo. Entretanto as doenÃas diarreicas ainda sÃo responsÃveis por 1,34 milhÃes de mortes infantis a cada ano e representam a segunda maior causa de mortalidade no grupo etÃrio com idade inferior a 5 anos. Com o declÃnio de mortalidade por casos de diarreia aguda a diarreia persistente (DP) se tornou uma das principais doenÃas entÃricas infantis contribuindo para morbidade das populaÃÃes afetadas. Uma lesÃo no intestino delgado que se torna prolongada tem sido colocada como elemento central da patofisiologia da DP. A desnutriÃÃo proteica e a infecÃÃo por Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) estÃo fortemente associados ao desenvolvimento da DP. O presente estudo investigou o efeito da suplementaÃÃo de Alanil-Glutamina sobre monocamada de cÃlulas da mucosa intestinal na ausÃncia de infecÃÃes. Avaliou alguns parÃmetros da lesÃo promovida por EAEC (cepa 239-1) sobre a mucosa intestinal in vitro e a modulaÃÃo de tal dano pela Alanil-Glutamina 10Mm. Os resultados obtidos mostram que os efeitos da suplementaÃÃo de Ala-Gln 10mM nÃo diferem dos efeitos exibidos pela glutamina livre 4mM. Em relaÃÃo a cepa comensal E. coli HS, a infecÃÃo com EAEC reduziu de forma significativa a quantidade de cÃlulas em migraÃÃo, aumentou o percentil de necrose, diminuiu a proliferaÃÃo celular e reduziu significativamente a transcriÃÃo dos genes das pequenas GTPases (RhoA, Cdc42 e Rac1) apÃs 6h de contato com enterÃcitos. O contato com EAEC reduziu a transcriÃÃo de IL-8 (0h e 6h), NF-κB (6h) e TLR5 (6h e 12h) e aumentou a expressÃo proteica de TNF- α (12h). O tratamento da infecÃÃo com Ala-Gln 10mM alterou significativamente os seguintes parÃmetros: aumento da quantidade de cÃlulas em migraÃÃo embora nÃo tenha causado alteraÃÃo na transcriÃÃo dos genes da pequenas GTPases, reduÃÃo do percentual de necrose, aumento da proliferaÃÃo celular, aumento da transcriÃÃo IL-8, NF-κB (6h) e TLR5 (6h e 12h). O tratamento com o dipeptidio reduziu significativamente a secreÃÃo de TNF-α (12h) enquanto aumentou a expressÃo proteica de IL-6 (6 e 12h). Em conclusÃo, verificamos que a privaÃÃo de glutamina diminui a resposta celular frente ao estÃmulo infeccioso. A EAEC, por sua vez, parece minimizar as defesas imunes inatas hospedeiro ao reduzir a transcriÃÃo de NF-kB e TLR5 e limitar o aumento da transcriÃÃo de IL-8. A Ala-Gln parece tornar a cÃlula mais reativa frente aos estÃmulos lesivos, aumentando sua capacidade de resposta atravÃs do aumento transcricional de IL-8, NF-kB e TLR5. Por outro lado o aumento da expressÃo proteica de IL-6 parece ser um dos mecanismos pelas quais Ala-Gln promove efeito protetor sobre a barreira epitelial intestinal.Death from acute diarrhea has been reduced since 80Âs. However diarrhoeal diseases account for nearly 1.34 million deaths a year among children under-five years of age, making them the second most common cause of child deaths worldwide. As mortality acute diarrhea was reduced, persistent diarrhea (PD) has become a major enteric diseases infant collaborating to morbidity of affected populations. Small intestinal mucosa injury that becomes prolonged has been named as a central mechanism in the pathophysiology of PD. The protein malnutrition and infection by Escherichia coli enteroaggregative (EAEC) are strongly associated with development PD. The present study investigated the effect of supplementation of Alanyl-Glutamine on monolayer of intestinal cells in the absence of infection, evaluated some parameters of the injury caused by EAEC (strain 239-1) on the intestinal mucosa in vitro and modulation of such injury by Alanyl-Glutamine 10mM. The result show that effects of supplementation of Alanyl-Glutamine 10mM is no different from effects free glutamine 4mM. Compared to E. coli HS, EAEC infection reduced the number of migrating cells, increased the percentage of necrosis, decreased the proliferation and transcription-reverse from small GTPases (RhoA, Rac1 and Cdc42), within 6 hours of contact. The contact EAEC reduced transcription of IL-8 (6h and 0h), NF-κB (6h) and TLR5 (6h and 12h) and increased TNF-α expression. The treatment of infection with Ala-Gln 10mM altered the following parameters: reduced the percentage of necrosis, increase of cell migration, although it has not caused changes in the transcription of Rho GTPases genes, increased transcription IL-8, NF-κB (6h) e TLR5 (6h and 12h). Treatment with dipeptidio significantly reduced the secretion of TNF-α (12h) while increased protein expression of IL-6 (6 e 12h). In conclusion, found that glutamine deprivation decreases cellular response against the infectious stimulus. The EAEC appears to minimize the innate host immune defenses by reducing the transcription of NF-kB and TLR5 and limit the increased transcription of IL-8. The Ala-Gln seems to make the cell more reactive against injurious stimuli, increasing their responsiveness through increased transcriptional IL-8, NF-kB and TLR5. Moreover increased protein expression of IL-6 appears to be one of the mechanisms by which promotes Ala-Gln protective effect on the intestinal epithelial barrier