Influência do ciclo estral no efeito do diazepam na ansiedade e memória de ratas

A memória e a ansiedade são fenômenos relacionados. Diversas evidências sugerem que a ansiedade é fundamental para o aprendizado, podendo facilitar ou prejudicar a formação de memórias dependendo da situação, o que se constitui num fator relevante tanto para o funcionamento normal dos processos cognitivos quanto para a compreensão dos transtornos de ansiedade. A maioria dos estudos com modelos animais que se propõe a estudar medo e ansiedade usa machos como sujeitos experimentais existindo, assim, escassez no estudo de fêmeas na literatura. Entretanto, a prevalência para transtornos fóbico-ansiosos é maior em mulheres do que em homens. Além disso, sabe-se que o gênero pode influenciar o efeito de benzodiazepínicos, fármacos classicamente utilizados no tratamento de transtornos de ansiedade. No intuito de contribuir para o estudo de transtornos fóbico-ansiosos e sua relação com processos de memória e aprendizado, o presente trabalho investigou (a) os efeitos do benzodiazepínico diazepam sobre o desempenho de ratas em uma tarefa de memória aversiva com concomitante avaliação da ansiedade/emocionalidade; (b) a influência das fases do ciclo estral de ratas no efeito do diazepam na ansiedade/emocionalidade e memória aversiva, assim como a interação entre ambas e (c) o papel de flutuações hormonais ao longo das fases do ciclo sobre ausência do efeito do diazepam no proestro, pois ratas nessa fase receberam ou não o antagonista do receptor da progesterona, mifepristona, previamente ao tratamento com diazepam. Para isso, foi utilizado o modelo da esquiva discriminativa em labirinto cruz elevado, previamente validado para estudos envolvendo ansiedade e aprendizagem. O aparato utilizado é uma adaptação do labirinto em cruz elevado convencional, constituído de dois braços abertos e dois braços fechados sendo que um dos fechados tem uma estimulação aversiva com som e luz. Foram utilizados os parâmetros: tempo no braço não-aversivo comparado ao tempo no aversivo e percentual de tempo no braço aversivo em diferentes divisões temporais para avaliar memória; percentual de tempo nos braços abertos, avaliação de risco, mergulhos de cabeça e exploração da ponta do braço aberto para ansiedade ; e distância percorrida para locomoção. A partir da curva dose-resposta, no primeiro experimento, observamos o efeito ansiolítico (4mg/kg) e amnéstico (2mg/kg) do diazepam. No segundo experimento, as ratas foram separadas de acordo com as fases do ciclo estral (metaestro/diestro, proestro e estro). Não foram observadas diferenças significativas na ansiedade/emocionalidade, nem entre fases do ciclo, nem do tratamento com diazepam (2mg/kg). O efeito amnéstico do diazepam ocorreu nas ratas em metaestro/diestro e estro, estando ausente nas ratas em proestro. Na presença da mifepristona as ratas em proestro exibiram o efeito amnéstico do diazepam e também passaram a apresentar efeito ansiolítico, o qual não havia sido observado previamente nesta dose. Os resultados demonstraram dissociação de efeitos amnésticos e ansiolíticos em fêmeas, não previamente observada em machos; ausência do efeito amnéstico do diazepam no proestro, que ocorre nas outras fases e o possível papel da progesterona na memória aversiva sob efeito do diazepam, uma vez que a mifepristona possibilitou o efeito amnéstico no proestro, fase na qual os níveis de progesterona estão elevadosMemory and anxiety are related phenomena. Several evidences suggest that anxiety is fundamental for learnining and may facilitate or impair the memory formation process depending of the context. The majority of animal studies of anxiety and fear use only males as experimental subjects, while studies with females are rare in the literature. However, the prevalence in phobic and anxiety disorders is greater in women than in men. Moreover, it is known that gender maybe influence benzodiazepine effects, the classic drugs used for anxiety disorders treatment. In this respect, to further investigate if fear/anxiety aspects related to learning in female subjects would contribute to the study of phobic and anxiety disorders and their relationship with learning/memory processes, the present work investigates (a) the effects of benzodiazepine diazepam on female rats performance in a aversive memory task that assess concomitantly anxiety/emotionality, as the interaction between both; (b) the influence of estrous cycle phases of female rats on diazepam effects at aversive memory and anxiety/emotionality, and the interaction between both and (c) the role of hormonal fluctuations during estrous cycle phases in absence of diazepam effects in proestrus, because female rats in this phase received or not mifepristone, the antagonist of progesterone receptor, previously to the diazepam treatment. For this purpose, the plus maze discriminative avoidance task, previously validated for studies of anxiety concomitantly to learning/memory, was used. The apparatus employed is an adaptation of a conventional plus maze, with two opens arms and two closed arms, one of which presenting aversive stimulation (noise and light). The parameters used were: time in non-aversive arm compared to time in aversive and percentage of time in aversive arm on several temporal divisions, in order to evaluate memory; percentage of time in open arms, risk assessment, head dipping and end exploring to evaluate anxiety ; and distance traveled for locomotion. In experiment I, we found anxiolytic effect of diazepam only for 4 mg/kg dose, however the amnestic effect appear at a dose of 2 mg/kg. In second experiment, rats were divided in groups according estrous cycle phase (metaestrus/diestrus, proestrus e estrus). In this experiment, when we considered estrous cycle phase or diazepam treatment, the results did not demonstrate any differences in anxiety/emotionality parameters. The amnestic effects of diazepam occur in female rats in metestrus/diestrus and estrus and is absent in proestrous rats. Proestrous female rats that received mifepristone exhibited the amnestic effect of diazepam and also anxiolytic effects, that it was not previously observed in this dose. The results have demonstrated dissociation of anxiolytic and amnestic diazepam effects, not previously observed in males; the absence of amnestic effect of diazepam in proestrous phase; and the possible role of progesterone in aversive memory over diazepam effect, because the mifepristone, associated with diazepam, caused amnestic effect in proestru