Protoplasts production from Napier grass and pearl millet triploid hybrids

Buscando gerar maior variabilidade que resulte em avanços na obtenção de cultivares superiores os programas de melhoramento genético do capim-elefante (2n = 4x = 28) realizam o cruzamento desta espécie com o milheto (2n = 2x = 14) Entretanto, o híbrido triplóide (3x) resultante é infértil impossibilitando sua utilização nesses A restauração da fertilidade pode ser conseguida pela duplicação cromossômica utilizando-se antimitóticos Porém esse processo de duplicação tem resultado na obtenção de plantas na maioria mixoplóides e poucas hexaplóides estáveis Devido a essa dificuldade este trabalho teve por objetivo estudar a germinação de sementes in vitro e a obtenção de protoplastos dos híbridos triplóides como base para futuros trabalhos de duplicação cromossômica via fusão de protoplastos e subseqüente regeneração de híbridos hexaplóides estáveis No experimento de germinação in vitro o meio de cultura utilizado constituiu-se do MS com (1 1/2 e 1/4) das concentrações de sais acrescidos de sacarose (1*5% e 3%) Avaliou-se aos 15 dias a porcentagem de sementes germinadas e aos 30 dias o crescimento e desenvolvimento das plântulas in vitro Para o experimento de obtenção de protoplastos foram utilizados explantes de mesofilo de plantas cultivadas in vitro e in vivo ou de calos de híbridos triplóides Após a assepsia das folhas in vivo as mesma foram seccionadas transversalmente em tiras de 1 a 1*5 mm de largura e transferidas para placas de Petri de 90 x 15 mm contendo 15 mL de meio CPW + 13% manitol Após a pré-plasmolise soluções enzimáticas em diferentes concentrações da enzima celulase R-10 (0*5 %; 1 %; 1*5 %; 2*0 %) acrescidas de 0*2% macerozyme e 0*1% driselase ou 1% pectolyase Y-23 e 0*5% hemicelulase A digestão enzimática foi monitorada durante 5 horas no escuro sob agitação de 40 rpm a 26±2°C O meio mais eficiente para a germinação e o crescimento das plântulas in vitro do híbrido foi aquele com a metade dos sais do MS acrescido de 3% de sacarose Obtiveram-se protoplastos a partir de folhas in vitro e in vivo de híbridos triplóides entre o capim-elefante e o milheto sendo as folhas in vitro as melhores fontes de explante quando digeridas pela solução enzimática 2 por cinco horas para o híbrido H2 e em três horas de digestão pela solução enzimática 5 para o híbrido H3