Semen cryopreservation of rainbow trout XX-males

O estudo foi conduzido entre julho e agosto de 2005 e 2006, com o objetivo de aperfeiçoar as técnicas de criopreservação do sêmen de machos de truta arco-íris obtidos por inversão sexual (machos-XX). Inicialmente, apenas os peixes que liberavam sêmen por pressão abdominal foram utilizados. No experimento 1, foram testados quatro diluidores de sêmen (glicose 5,4%, NaCl 0,9%, NaCl 1,2%-tris e BTS®) e o efeito da adição da gema de ovo aos diluidores. Depois, o efeito dos crioprotetores DMSO, etileno glicol, metil glicol e metanol, taxas de diluição de 1:3 e 1:7 (experimento 2), das palhetas de 0,25; 0,5 e 4,0 ml (experimento 3) e do descongelamento das palhetas a temperaturas do banho-maria de 70ºC/3s, 60ºC/8s e 50ºC/8s (experimento 4) foi avaliado quanto à motilidade espermática. No experimento 5, o sêmen congelado foi avaliado quanto à capacidade de fertilização (taxa de ovos olhados), em diferentes proporções espermatozóide:ovo (15x106 a 60x106), após 196°C dias de incubação. Em todos os experimentos, as amostras de sêmen diluídas foram congeladas em vapor de nitrogênio (N2), a -170°C, por 12-16 horas, até serem transferidas para o N2 líquido. Na fase seguinte, apenas o sêmen obtido diretamente dos testículos (intratesticular) foi utilizado. No experimento 1, o sêmen foi diluído em três diluidores (glicose 5,4%, NaCl 0,9% ou NaCl 1,2%-tris), gema e DMSO. As amostras foram congeladas conforme descrito na fase inicial e descongeladas a 70°C/3s ou 35°C/16s. Depois, o período de incubação de 01h30min, antes do congelamento, foi testado no sêmen diluído (1:0, 1:6 ou 1:8, experimento 2; 1:5, 1:7 ou 1:9, experimento 3) em plasma seminal e congelado em glicose ou NaCl como diluidores (experimento 3), gema de ovo e DMSO. As amostras de sêmen coletadas por meio de massagem abdominal apresentaram as maiores taxas de motilidade espermática pós-descongelamento quando criopreservadas em meio contendo glicose, gema e DMSO, na proporção 1:3, envasadas em palhetas de 0,5 ml e descongeladas a 70ºC/3s. As maiores taxas de ovos olhados foram produzidas com sêmen descongelado nas proporções acima de 30x106 espermatozóides:ovo. Quando o sêmen intratesticular foi congelado diretamente, sem passar pelo período de incubação, as taxas de motilidade espermática pós-descongelamento foram baixas; entretanto, quando diluído 1:6 em plasma, incubado e re-diluído 1:3 em glicose-gema-DMSO, a motilidade espermática aumentou de 18% para 60%. Com base nos resultados deste trabalho, conclui-se que o sêmen de machos- XX de truta arco-íris pode ser criopreservado em meio contendo glicose, gema e DMSO, em palhetas de 0,5 ml e descongelado a 70ºC/3s. O sêmen intratesticular pode ser criopreservado com o mesmo protocolo, mas precisa ser previamente incubado em plasma seminal, por 01h30min