Chromosome duplication and ploidy identification using flow cytometry in Brachiaria spp.

No Brasil, as espécies de Brachiaria mais cultivadas são B. decumbens, B. brizantha, B. humidicola e B. ruziziensis. A Brachiaria ruziziensis é diploide e sexual e as cultivares comerciais de B. brizantha e B.decumbens, que são as espécies mais difundidas no Brasil, são tetraploides e apomíticas. Uma das alternativas do melhoramento de Brachiaria é a realização de hibridações interespecíficas, sendo necessária a tetraploidização artificial da B. ruziziensis, bem como o conhecimento do nível de ploidia dos genótipos de interesse. Assim, neste trabalho objetivou-se a obtenção de genótipos duplicados de B. ruziziensis, a caracterização do nível de ploidia, por meio da citometria de fluxo e do número cromossômico somático, e a indicação de um protocolo de citrometria de fluxo adequado para análise de genótipos de Brachiaria do programa de melhoramento da Embrapa Gado de Leite. No experimento de duplicação a taxa de sobrevivência das plântulas foi de 8% sendo obtidos 11 genótipos tetraploides e 16 mixoploides. Na America, este é o primeiro relato de duplicação cromossômica em Brachiaria ruziziensis. Na análise de 15 genótipos o conteúdo de DNA variou de acordo com o nível de ploidia (2x, 3x e 4x) e espécie e/ou taxon. A quantidade média de DNA de B. ruziziensis foi de 1,74 pg (2x), já para B. decumbens observou-se 3,74 pg (4x); na B. brizantha 3,52 pg (4x). Para o genótipo 86 obteve-se 2,52 pg de DNA, indicando tratar-se de um acesso triploide, com 2n=3x=27, provavelmente um híbrido natural. São apresentados a quantidade de DNA pelos Valores C e Cx de todos os genótipos. A variação nas estimativas da quantidade de DNA total permitiu distinguir a Brachiaria ruziziensis das espécies tetraploides Brachiaria decumbens e Brachiaria brizantha e do provável híbrido triploide natural entre estas espécies. Para a contagem do número cromossômico somático, foram observados 18, 27 e 36 cromossomos para os diploides, triploide e tetraploides, respectivamente. Há concordância entre os resultados obtidos por citometria de fluxo e por contagem de cromossomos somático. Na avaliação de diferentes protocolos (3 tampões x 3 padrões) de preparo de amostra para análise em citômetro de quatro genótipos de Brachiaria, foram analisadas três variáveis: coeficiente de variação do pico G1 da amostra no histograma, nota do histograma e estimativa do conteúdo de DNA. O protocolo mais adequado para o preparo da amostra foi o tampão MgSO4, tendo o rabanete (Raphanus sativus) como padrão de referência para os genótipos B. ruziziensis (2x e 4x), B. brizantha e o híbrido triploide apesar da sobreposição do pico G1 deste último com o pico G2 do padrão rabanete. A nota do histograma foi eficiente na avaliação dos protocolos de preparo de amostra para a estimativa do conteúdo de DNA dos diferentes genótipos de Brachiaria, sendo apropriada a utilização da metodologia com nota igual ou superior a 4