Optimization of the PCR technique for detection of Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli in bean seeds

O crestamento bacteriano comum, causado por Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap), é a principal bacteriose do feijoeiro no Brasil, sendo transmitida principalmente por sementes. O presente trabalho foi realizado com o objetivo de aperfeiçoar uma técnica para detecção de Xap em sementes de feijão, por meio da utilização de diferentes métodos de preparação do extrato para a detecão via PCR, além da detecção simultânea de Xap e Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens (Cff) nos extratos, utilizando a Bio-PCR. Após a inoculação das sementes de feijão, foram avaliados: extrato bruto, obtido diretamente das sementes, extrato concentrado em membrana milipore, extrato concentrado por centrifugação e extrato plaqueado em meio seletivo (Bio-PCR). Avaliou-se a presença de Xap e de Cff, em lotes comerciais de feijão provenientes de diversas regiões do Brasil, utilizando-se os mesmos procedimentos das sementes inoculadas. Para a otimização da técnica de PCR, foram utilizados os primers X4c e X4e. A partir do extrato bruto, do extrato concentrado por centrifugação e por membrana milipore, não foi possí­vel a detecção de Xap nas sementes de feijão artificialmente contaminadas nem nos 47 lotes comerciais de sementes/grãos de feijão. A técnica de Bio-PCR permitiu a detecção de Xap a partir de extratos de sementes de feijão artificialmente contaminadas e em 18 dos 47 comerciais. A técnica de detecção simultânea de Xap e Cff no mesmo gel não foi viável, por amplificar fragmentos de DNA tí­picos de Cff na amostra controle Xap. O meio de cultura semi-seletivo XCP1 sem antibióticos pode ser utilizado para a recuperação de colônias de Xap