Desenho de primers e clonagem do gene do capsídeo de fitovírus para uso como controles positivos na diagnose por RT-PCR

O constante intercâmbio de materiais vegetais para propagação, apesar de proporcionar um bom desempenho da atividade agrícola no Brasil, expõe o país ao risco de introdução de patógenos indesejados. Para evitar que isso aconteça, a diagnose precoce de fitopatógenos, tanto dos quarentenários como dos não quarentenários regulamentados é indispensável. No caso dos vírus, o estabelecimento de técnicas eficientes, para a sua diagnose, tem sido um grande desafio, pois, compõem um grupo de patógenos de plantas com elevada importância, em decorrência das perdas de produção que podem causar e, também, da ausência de métodos de controle curativos. Uma das maiores limitações, para o desenvolvimento desses métodos, é a falta de controles positivos, para checar a confiabilidade da técnica diagnóstica empregada, pois, sempre existe a possibilidade de obtenção de falsos negativos e/ou falsos positivos. Neste trabalho objetivou-se contribuir para a formação de um banco de controles positivos para vírus, por meio da clonagem do gene da proteína do capsídeo em plasmídeos e do desenho de primers para serem empregados na sua diagnose por RT-PCR. Foram clonados fragmentos genômicos de 3 vírus quarentenários e de 8 vírus não quarentenários. Todos os plasmídeos contendo os fragmentos genômicos virais e os primers foram testados e se comportaram como controles positivos confiáveis para serem empregados na diagnose dos respectivos vírus