Colonização de sementes e plantas de tomate cultivadas in vitro por Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis transformadas com gfp

Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Cmm) é o agente etiológico do cancro bacteriano do tomateiro, uma das mais sérias doenças da cultura. Neste trabalho, um isolado de Cmm espontaneamente resistente à rifampicina (IPO3356) foi marcado com o gene gfp para estudos da colonização de plantas de tomateiro cultivadas axenicamente. O transformante (IPO3525) expressou a proteína de maneira estável in planta e apresentou virulência comparável à da estirpe selvagem. As plantas foram inoculadas com 100 μl da suspensão bacteriana na base do caule e o número de ‘Unidade Formadora de Colônia’ (UFC) por grama de tecido foi determinado por diluição em placas em meio seletivo. Cmm colonizou de forma eficiente as plantas in vitro as quais desenvolveram sintomas típicos da doença. A presença de Cmm nos tecidos vascular e parenquimático foi confirmada. Foi estudada também a localização da bactéria em sementes de tomate inoculadas artificialmente com a estirpe Cmm-GFP IPO3525. Utilizando microscopia confocal foi confirmada a presença IPO3525 nos tricomas, nas camadas exteriores, testa e nas células do endosperma e embriões. Aos 36 dias após plantio não houve sintomas visíveis em qualquer das plantas infectadas, mas houve baixa incidência de IPO3525. Não foi detectada a presença de IPO3525 em plantas com 23 dias e nem do isolado selvagem IPO3356 em plantas com 36 ou 23 dias após plantio. Cmm-GFP pode ser usado efetivamente para estudos detalhados de colonização in planta e sementes de tomate.Tese apresentada à Universidade Federal de Lavras como parte das exigências do Programa de Pós-Graduação em Agronomia, área de concentração Fitopatologia, para a obtenção do título de Doutor