Prevalence of the TNFA -1031 T>C gene polymorphism in a group of type I diabetic patients and its relation to severe periodontitis

Diabetes mellitus e doenças periodontais são altamente prevalentes na população mundial. Doenças periodontais (DPs) compreendem um grupo de condições crônicas inflamatórias induzidas por microorganismos que levam à inflamação gengival, à destruição tecidual periodontal e à perda óssea alveolar. Diabetes mellitus (DM) é o termo utilizado para descrever um grupo de desordens metabólicas associadas à intolerância à glicose e ao metabolismo inadequado de carboidratos. Uma vez que DPs poderiam agir de forma similar a outros estados infecciosos sistêmicos, aumentando a severidade do diabetes, uma possível relação entre ambas tem sido considerada em todo o mundo. Polimorfismos genéticos de um único nucleotídeo (SNPs) têm sido estudados em diversas doenças. Nas periodontites, acredita-se que possam estar envolvidos na exacerbação da resposta inflamatória frente ao desafio bacteriano, modificando a susceptibilidade do hospedeiro. Neste estudo, a prevalência de periodontite foi avaliada em portadores de diabetes mellitus tipo I. Posteriormente, o SNP localizado na região promotora do gene TNFA (-1031T>C) foi analisado e sua importância para a doença periodontal destrutiva foi avaliada. O grupo teste foi constituído por diabéticos tipo I (DGT, n=113) enquanto o grupo controle por indivíduos não diabéticos (ND, n=73). Para as análises dos polimorfismos genéticos, um subgrupo foi retirado do grupo teste (DG, n=58) e comparado ao grupo ND. Os seguintes parâmetros clínicos e demográficos foram avaliados: percentual de sítios com profundidade de bolsa &#61619; 6,0 mm (%PBS&#61619;6,0 mm); índice gengival (IG); perda óssea radiográfica (POR); fumo; duração do diabetes ; idade; índice de massa corpórea (IMC), n&#61616; de internações e n&#61616; de dentes presentes. Amostras de sangue e/ou esfregaço bucal foram colhidas de 58 pacientes do grupo teste e de 73 controles. Após a extração do DNA genômico e amplificação da região genômica de interesse por PCR (Polymerase Chain Reaction), o polimorfismo TNFA 1031T>C foi analisado por BbsI RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism). A análise dos produtos de digestão foi feita por eletroforese em gel de poliacrilamida 8%. A análise estatística das freqüências alélica e genotípica juntamente com os dados clínicos e epidemiológicos entre os 2 grupos foi feita através do teste do Mann-Whitney e do Qui-quadrado. Os grupos de estudo obedecem ao princípio de Hardy-Weinberg. No grupo ND, as seguintes freqüências genotípicas foram encontradas: 78,1% (T/T); 20,5% (T/C) e 1,4% (C/C) enquanto no grupo D foram: 42,4%(T/T); 37,3% (T/C) e 20,3% (C/C). A frequência do alelo T no grupo diabético (D) foi de 0,610 ao passo que no grupo ND foi de 0,883. Não foi possível encontrar uma relação entre o polimorfismo -1031 T>C do gene TNFA e a presença de periodontite em diabéticos tipo I. Entretanto, o polimorfismo estudado se mostrou significativamente relacionado (p<0,0001 e OR= 4.85 95%IC 2,271-10,338) à presença do diabetes tipo I.Diabetes mellitus and periodontal diseases are highly prevalent worldwide. Periodontal disease (PD) combines a group of chronic inflammatory conditions induced by microorganisms that leads to gingival inflammation, periodontal tissue destruction and alveolar bone loss. Diabetes mellitus (DM) is a term used to describe a group of metabolic disorders associated to glucose intolerance and inappropriate carbohydrate metabolism. Once PDs could act in a similar way to other systemic infectious states increasing diabetes severity, a possible correlation between both has been considerate around the world. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) have been studied in relation to several diseases. In periodontitis, it is believed to be involved in an exacerbated inflammatory response due to bacterial challenge, modifying the host susceptibility. In this study, the prevalence of periodontal disease was evaluated in type I diabetes patients (TIDM). Further on, the SNP in the promoter region of the TNFA gene (-1031T>C) was analyzed and its importance to destructive periodontal disease was considered. The test group was formed by type I diabetic patients (TDG, n=113) and the control group was composed by non-diabetic patients (ND, n=73). For the genetic polymorphism analysis a subgroup was taken from the test group (DG, n=58) and compared to the ND group. The following clinical and demographic parameters were assessed: percentage of sites with periodontal pocket depth (PPD) &#61619; 6.0mm; gingival index (GI); radiographic bone loss (RBL); smoking habits; diabetes duration; age; bone mass index (BMI); number of admissions and number of teeth. Blood samples and oral epithelial cells were collected from 58 patients of the test group and 73 controls. After genomic DNA extraction and amplification of the genomic region of interest by PCR (Polymerase Chain Reaction), the TNFA 1031T>C polymorphism was analyzed by BbsI RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism). Analysis of the digestion products were performed by 8% polyacrylamide gel electrophoresis. The statistical analysis of the genotypes and allelic frequencies along with the clinical and epidemiological data between the two groups were done through the Mann-Whitney and Chi-square tests. The study groups are in Hardy-Weinberg equilibrium. In the ND group, the following genotypic frequencies were found: 78.1% (T/T); 20.5% (T/C) e 1.4% (C/C), while for the D group, they were: 42.4% (T/T); 37.3% (T/C) e 20.3% (C/C). The frequencies of T allele in the D and ND groups were 0.610 and 0.883, respectively. It was not possible to find any correlation between the -1031 T>C promoter polymorphism of the TNFA gene and the presence of periodontitis in type I diabetic patients. However the studied polymorphism showed to be significantly related (p