Estudo da Qualidade Nutricional de Sementes e da Atividade Antiinflamatória da Lectina do Abelmoschus esculentus (L.) Moench (quiabo)

A alimentação humana não convencional ou alternativa é composta por alimentos ou suas partes não habitualmente utilizadas, cujo valor nutritivo vem sendo avaliado ao longo dos últimos anos. Isso fez com que sementes de várias espécies vegetais tornassem recursos alternativos de proteínas e lipídeos para a alimentação humana. O isolamento e a caracterização físico-química de novas moléculas de alimentos vegetais, com vistas à sua ação fisiológica no organismo humano, utilizada como fonte potencial para o descobrimento de novas moléculas bioativas. Um grupo particular dessas moléculas, as lectinas, são proteínas de origem não imune contendo pelo menos um domínio não catalítico de ligação específica, e reversível, a carboidratos. Várias lectinas têm sido estudadas, tanto do ponto de vista de caracterização físico-química quanto biológica. Nesse contexto, o quiabo Abelmoschus esculentus (L.) Moench, (Malvaceae), hortaliça bastante difundida na região Nordeste do Brasil, além de fácil acesso e baixo custo, apresenta-se como uma fonte bastante promissora na busca por novas lectinas. Entretanto, pesquisas relativas à sua purificação e ao seu isolamento ainda são incipientes. Objetiva-se com este trabalho avaliar a qualidade nutricional das sementes do quiabo, detectar, purificar e caracterizar físico-quimicamente, avaliar o potencial fitoterápico e farmacológico (antinocicepitivo, citotóxico, antiinflamatório e antifúngico) da lectina isolada de sementes de Abelmoschus esculentus. As sementes apresentaram uma predominância de carboidratos totais representados pelas fibras (30,81%) e carboidratos solúveis (6,69%), proteinas (22,14%) e lipídeos (14,01%). A lectina da farinha das sementes foi extraída com Tris 0,1M pH 7,4 com NaCl 0,15M. A detecção da existência de lectinas (AES) foi determinada através de ensaio de atividade hemaglutinante e revela que eritrócitos humanos B (24.00 UH.mP-1), O (21.00 UH.mP-1) e coelho tratado e não tratado (74.41 UH.mP-1) foram aglutinados pela lectina. A lectina foi purificada por precipitação com sulfato de amônio e purificada em coluna de troca iônica. Eritrócitos de coelho foram utilizados para os testes de inibição da atividade hemaglutinante (UH) com carboidratos. Sua atividade hemaglutinante foi inibida por lactose, frutose e manose. O perfil protéico da AES analisado por PAGE-SDS demonstra que a lectina encontra-se purificada, apresentando duas bandas de massa molecular aparente entre 25 e 14 kDa. A análise por espectrometria de massa mostrou a forma monomérica com 10,29 kDa e seu dímero de 20,58 kDa. Os testes de atividade biológica da lectina de farinha de sementes previamente purificada apresentaram atividade antiinflamatória, antinociceptiva e não apresentou citotoxicidade frente a hemácias do sistema ABO. O pré-tratamento endovenoso dos animais com a AES (0,01; 0,1 e 1mg/kg), antes da administração do agente flogistico (carragenina), reduziu significativamente o edema em cerca de 15%, 21,6%, 44%. Esta inibição é dose dependente tendo seu máximo efeito na dose de 1mg/kg. A lectina de Abelmoschus esculentus apresenta atividade antinociceptiva no teste de contorções abdominais induzidas por ácido acético e os extratos da semente de quiabo são capazes de reconhecer e inibir o crescimento do fungo dermatófito Tricophytum rubrum.The human unconventional or alternative feeding consists of foods or parts not normally used, whose nutritional value has been evaluated over the past years. This made the seeds of various plant species to become alternative sources of proteins and lipids for human consumption. The isolation and physicochemical characterization of new molecules of plant foods, with a view to their physiological action in the human body, are used as potential source for the discovery of new bioactive molecules. A particular group of these molecules, the lectins, are proteins of nonimmune origin containing at least one non-catalytic domain of specific binding, and reversible, the carbohydrates. Several lectins have been studied, both in terms of physicochemical and biological characterization. In this context, okra Abelmoschus esculentus (L.) Moench, (Malvaceae), a vegetable widespread in Northeastern Brazil, besides the easy access and low cost, seems to be a promising source in the search for new lectins. However, research on its purification and isolation are still incipient. The objective of this study was to evaluate the nutritional quality of okra seeds, and to detect, purify, and characterize the physicochemical aspects, and to evaluate the herbal and pharmacological potential ( antinocicepitive,cytotoxic anti-inflammatory and antifungal activity) of the isolated lectin present in Abelmoschus esculentus seeds.showed a predominance of total carbohydrates represented by fibers (30.81%) and soluble carbohydrates (6.69%), proteins (22.14%) and lipids (14.01%). The lectin from seed flour was extracted with 0.1 M Tris pH 7.4 with 0.15 M NaCl. The detection of the presence of lectins AES was determined by testing hemagglutination activity and human erythrocytes shows that B (24.00 UH.mP-1), O (21.00 UH.mP-1) and rabbits treated and untreated (74.41 UH. mP-1) were agglutinated by the lectin.The lectin was purified by precipitation with ammonium sulfate and eluted in ion exchange column. Rabbit erythrocytes were selected for testing the inhibition of the hemagglutinating activity (UA) in carbohydrates. Its hemagglutinating activity was inhibited by lactose, fructose and manose. The protein profile of AES analyzed by PAGE-SDS demonstrates that the lectin is purified, presenting two bands of apparent molecular mass between 25 and 14 kDa. The analysis by mass spectrometry showed the monomeric form with 10.29 kDa and its dimer of 20.58 kDa. The biological activity tests of the lectin from AES flour previously purified presented anti-inflammatory and antinociceptive activity and showed no cytotoxicity when compared to erythrocytes from the ABO system. The intravenous pretreatment of animals with AES (0.01, 0.1 and 1 mg / kg) before the administration of the phlogistic agent (carrageenan) significantly reduced the edema by about 15%, 21.6%, 44%. This inhibition is dose dependent with maximum effect at 1mg/kg. The lectin from Albemoschus esculentus shows antinociceptive activity in writhing test induced by acetic acid and the okra seed extracts are able to recognize and inhibit the growth of the dermatophyte Tricophytum rubrum fungus