Diagnóstico molecular e sorológico de Chlamydophila spp em amostras biológicas de animais experimentalmente e naturalmente infectados

Chlamydophila abortus (anteriormente classificada como Chlamydia psittaci sorotipo 1) tem sido descrita em muitos países, associada principalmente com distúrbios reprodutivos em ovinos, bovinos e caprinos. A detecção de C. abortus é usualmente realizada por métodos sorológicos (fixação de complemento, ELISA) e de cultivo em células de linhagens ou ovo embrionado de galinha. O diagnóstico pela amplificação do DNA pela PCR tem sido proposto por apresentar alta sensibilidade e especificidade. Este trabalho teve por objetivo detectar Chlamydophila spp por técnicas molecular e sorológica em amostras biológicas de animais experimentalmente e naturalmente infectados. Um sistema de PCR foi desenvolvida para a amplificação do espaço intergênico 16S-23S do RNAr da família Chlamydiaceae, em órgãos de camundongos (n=15) experimentalmente infectados com a estirpe de referência S26/3 da C. abortus. Os resultados encontrados foram comparados a outro sistema de PCR previamente descrito para o gene Omp2 (outer major protein). Dos 15 camundongos inoculados com C. abortus, 13 foram positivos na RNAr PCR e nove na Omp2 PCR. O limite de detecção de C. abortus pela RNAr PCR (1,05 unidades formadoras de inclusão -UFI) foi cem vezes superior à Omp2 PCR (105 UFI). A RNAr PCR também foi utilizada para a detecção da C. abortus em uma coleção de abortos bovinos (n=85), ovinos (n=12) e caprinos (n=8), em amostras de muco vaginal de ovelhas (n=90) e de cabras (n=20) e em sêmen de ovinos (n=10) e caprinos (n=5), coletados no período de 2002 a 2007. Um controle interno (PCR com os primers BOV1 e BOV2 para o gene ND5 do DNA mitocondrial de bovino) foi utilizado nas amostras de aborto bovino para a avaliação da eficiência das técnicas de extração e de amplificação do DNA. Todas as amostras de aborto, muco vaginal e sêmen foram negativas para C. abortus na RNAr PCR. O controle interno amplificou um produto de 626 pb para o gene ND5 em todas as amostras de aborto bovino. Para o diagnóstico sorológico, 3.102 amostras de soro de fêmeas bovinas (idade > 24 meses) provenientes de 373 propriedades, com histórico de abortamento, foram testadas pela prova de fixação de complemento. As propriedades rurais com abortamento foram selecionadas dentro do delineamento amostral do Plano Nacional para o Controle e Erradicação da Brucelose no estado do Paraná. Ao total, 44 (1,42%) animais foram positivos com títulos >32. A soroprevalência estimada para Chlamydophila spp nas propriedades foi de 8,82% (6,15%-12,17%). A criação de animais confinados ou semiconfinados foi considerada uma associação de risco (OR= 2,21; p= 0,031). Apesar da falta de evidência de C. abortus nas amostras de aborto, muco vaginal e sêmen, avaliadas pela PCR neste trabalho, os resultados sorológicos positivos das fêmeas bovinas de propriedades com histórico de abortamento no estado do Paraná sugerem a presença da bactéria. Assim, novos estudos sobre a ocorrência de Chlamydophila spp. em rebanhos bovinos, ovinos e caprinos do país devem ser realizados.Chlamydophila abortus (previously Chlamydophila psittaci serotype 1) is reported in many countries, related with reproductive disorders mainly in ovine, bovine and goat. Usually, C. abortus detection is carry out by serologic methods (complement fixation test, ELISA) and in cell cultures or embryonated chicken eggs. DNA amplification diagnosis by PCR showed high sensibility and specificity. The aim of this study was to detect Chlamydophila spp. by molecular and serologic methods in samples of experimentally and naturally infected animals. A PCR was developed to amplified the 16S-23S rRNA intergenic space of Chlamydiaceae in organs of mice experimentally infected with S26/3 strain of C. abortus (n=15). The results were compared with other PCR, previously described, and based in the Omp2 gene (outer major protein) of Chlamydiaceae family. Of the 15 mice inoculated with C. abortus, 13 had been positive in rRNA PCR and 9 in Omp2 PCR. The detection limit of C. abortus in rRNA PCR (1,05 UFI) was a hundred times superior to Omp2 PCR (105 UFI). This rRNA PCR was also used to detect C. abortus in a collection of bovine abortions (n=85), sheep (n=12) and goat (n=8), in samples of ewe (n=90) and goat vaginal discharge (n=20) and ram (n=10) and goat semen (n=5), collected between 2002 a 2007. An internal control (PCR with BOV1 and BOV2 primers for gene ND5 of bovine mitochondrial DNA) was used in bovine abortion samples for evaluation of efficiency of DNA extration and PCR. All abortion, vaginal discharge and semen samples were negative in PCR for C. abortus. The internal control amplified a product of 626 pb for ND5 gene in all bovine abortion samples. To serologic diagnosis, 3.102 serum samples of cows (age > 24 months), from 373 herds with abortion were analyzed by complement fixation test. These herds were selected inside the sampling design of National Program of Control and Erradication of Brucellosis in Paraná state. Forty four (1.42%) animal were positive with titers > 32. The seroprevalence of Chlamydophila spp in the herds was 8.82% (6.15%-12.17%). Confined or semi-confined breeding was a risk association (OR = 2.21, p = 0.031). Although the lack of evidence of C. abortus in abortion, vaginal discharge e semen by PCR in this study, positive serologic results in cows from herds with abortions in Paraná state, Brazil suggest the occurrence of the bacterium infection. Thus, more studies should be done about the occurrence of Chlamydophila spp. in bovine, ovine and caprine in Brazil