Identificação de um gene que afeta a produção de ocratoxina A em Aspergillus carbonarius

A ocratoxina A é uma micotoxina produzida principalmente por espécies pertencentes aos gêneros Aspergillus e Penicillium, conhecida por apresentar efeitos nefrotóxicos e potencial carcinogênico. Com relação ao gênero Aspergillus, a espécie A. carbonarius é apontada como uma das maiores fontes de produção de ocratoxina A em alimentos como frutas secas, uvas, vinho e grãos de café. Genes envolvidos na via de biossíntese da ocratoxina A já foram identificados em algumas espécies produtoras. Em Aspergillus ochraceus, Aspergillus westerdijkiae e espécies de Penicillium foi descrito um gene que codifica para a policetídeo sintase, uma enzima envolvida nos primeiros passos da biosíntese dessa micotoxina. Entretanto, para A. carbonarius ainda são poucos os estudos que visam identificar estes genes. O uso de mutantes insercionais para a identificação de genes associados a determinadas propriedades tem sido cada vez mais frequente na literatura. Neste trabalho foi investigada a região de integração do T-DNA em um mutante de A. carbonarius, previamente obtido por transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens, com o objetivo de encontrar uma associação entre o gene interrompido e a biossíntese de ocratoxina A. Este mutante apresentou baixa produção de ocratoxina A quando comparado com a linhagem selvagem. A integração do T-DNA ocorreu em um gene que possivelmente codifica uma proteína coativadora de splicing. Esta integração resultou na interrupção do gene e, além disso, causou uma deleção de 727pb. A deleção inclui a parte final do gene coativador de splicing e a uma região não-codificante entre esse gene e o gene F-actina. A análise da expressão relativa do gene coativador de splicing na linhagem selvagem cultivada em quatro diferentes meios que induzem ou reprimem a produção de ocratoxina A, mostrou uma associação entre o nível dos transcritos e a produção da toxina.Ochratoxin A is a mycotoxin produced mainly by species belonging to the Aspergillus and Penicillium genera, known to have nephrotoxic effects and carcinogenic potential. With respect to the genus Aspergillus, A. carbonarius is the major source of ochratoxin A production in foods such as dried fruits, grapes, wine and coffee beans. Genes involved in the ochratoxin A biosynthesis pathway have been identified in some producers species. In Aspergillus ochraceus, Aspergillus westerdijkiae and Penicillium species was described a gene that encodes a polyketide synthase, an enzyme involved in the early steps of the biosynthesis of this mycotoxin. However, there are few studies which purpose to identify these genes in A. carbonarius. The use of insertion mutants in order to identify genes associated with certain properties have been increasingly in the literature. In this work, the region of T-DNA integration was investigated in one A. carbonarius mutant previously obtained by the Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation, in order to find an association between interrupted gene and the biosynthesis of ochratoxin A. This mutant showed reduced ochratoxin A production when compared with the wild strain. The T-DNA integration occurred in a gene that possibly encodes a splicing coactivator protein. This integration resulted in the interruption of the gene and, furthermore, provoked a deletion length of 727bp. The deletion includes a final portion of a splicing coactivator gene and a non-coding region between this gene and the F-actin gene. The analysis of the relative expression of the splicing coactivator gene from A. carbonarius wild type strain in four different media that induce or repress the ochratoxin A production, showed an association between the transcript levels and the toxin production