Resposta imune de suínos imunizados pela via nasal com proteínas de roptrias do Toxoplasma gondii

O Toxoplasma gondii é um parasita intracelular obrigatório que pode acometer uma ampla variedade de hospedeiros inclusive o homem. Os herbívoros domésticos são as principais fontes de infecção para os seres humanos e a carne suína é considerada uma das mais importantes via de transmissão nesta doença. Nas últimas décadas houve um grande aumento no número de tecnologias e pesquisas para a produção de imunógenos. No entanto, apenas uma vacina comercial (Toxovax, lançada em 1992), para uso em ovinos, encontra-se disponível no Reino Unido. Esta vacina apresenta uma série de inconvenientes como risco de contaminação, baixo tempo de conservação, apresentação de sinais clínicos pelo animal e não pode ser usada durante a gestação. O desenvolvimento de vacinas não infectantes tais como vacinas de subunidades, vacina de DNA, assim como vacinas com proteínas recombinantes do T. gondii, devem ser estimulados. O presente estudo tem como objetivos avaliar a imunidade humoral e celular em suínos imunizados pela via nasal com proteínas de roptrias do T. gondii associadas ao imunoestimulante Quil-A. As roptrias foram obtidas a partir do rompimento mecânico de taquizoítas da cepa LIV-5 e posteriormente separados por gradiente isopínico de sacarose. Foram utilizados 13 suínos mestiços, divididos em três grupos, G1 (n=6) receberam proteínas de roptrias (200 µg) associadas ao Quil-A (50 µg), G2 (n=4) e G3 (n=3) receberam Quil-A (50 µg) e PBS, respectivamente. Todos os tratamentos foram administrados pela via nasal nos dias 0, 21 e 42. No dia 49 dois animais do G1 foram eutanasiados e realizada coleta de sangue e linfonodos mesentéricos para avaliação da imunidade celular, através do teste de proliferação de linfócitos e os demais animais desse estudo foram desafiados com 103 oocistos infectantes da cepa VEG. Sinais clínicos e temperatura foram analizados antes e depois do desafio. A imunidade humoral (IgG e IgM) foi avaliada nos dias 0, 21, 42, 49, 64, 79 utilizando o Ensaio Imunoenzimático Indireto (ELISA). A presença de cistos nos cérebros dos suínos foi avaliada pela técnica de bioensaio em camundongos. O único sinal clínico observado nos suínos foi febre do 6° ao 8° dia após o desafio. Cinco de seis animais do G1 produziram anticorpos acima do ponto de corte, sete dias após três doses do imunógeno (dia 49), onde três suínos produziram níveis de anticorpos tanto para IgG quanto para IgM e os outros dois responderam somente para IgM. Houve maior proliferação celular específica contra proteínas de roptrias nos linfócitos coletados dos linfonodos mesentéricos, comparados aos do sangue. Proteção parcial contra formação de cistos teciduais foi observada no G1, quando comparado com o G3. Os fatores de proteção foram de 41,6% e 6,5%, no G1 e G2, respectivamente. Como conclusão, os animais foram estimulados parcialmente na resposta imune humoral, porém, apresentaram estímulo para a resposta imune celular tanto local como sistêmica.Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that infects a wide range of hosts including human beings. Herbivores are the main domestic infection sources for humans, and pork is considered the most important route of transmission. Recent decades have witnessed a great increasing in the number of technologies and immunological research to produce new vaccines. However, only one commercial vaccine (Toxovax, launched in 1992) for use in sheep is available in the UK. However, it is infective for humans, expensive, and has a short shelf-life. The development of non-infective vaccines such as subunit vaccines, DNA vaccine, as well as vaccination with recombinant proteins of T. gondii, should be encouraged. This study aims to evaluate the humoral and cellular immunity in pigs immunized intranasally with T. gondii rhoptry protein plus Quil-A. The rhoptries were obtained from the mechanical disruption of T. gondii tachyzoites of LIV-5 strain and subsequently separated by sucrose gradient. We used 13 crossbred pigs, divided into three groups, G1 (n = 6) received rhoptry proteins (200 µg) associated with Quil-A (50 µg), G2 (n = 4), and G3 (n = 3) which received Quil -A (50 µg) and PBS, respectively. All treatments were administered by nasal route on days 0, 21 and 42. On day 49, two animals from G1 were euthanized. Blood and mesenteric lymph nodes (LNM) were collected for evaluation of cellular immunity, through the test of lymphocyte proliferation and the other animals this study were challenged with 103 infective oocysts of the VEG strain. Clinical signs and temperature were analyzed before and after challenge. The humoral response (IgG and IgM) was evaluated on days 0, 21, 42, 49, 64, 79 using indirect immunoenzymatic test (ELISA). The presence of cysts in the brains of pigs was analyzed by bioassay in mice. The only clinical sign was fever observed in pigs from the 6th to 8th day after challenge. Five out of six animals from G1 had antibodies above cut-off at challenge day. Three from these five animals had both IgM and IgG responses, however, two animals showed just IgM response. There was a greater proliferation against T. gondii rhoptry proteins in lymphocytes collected from LNM compared to the blood cells. Partial protection against tissue cysts formation was observed in G1 compared to G3. The protection factors were 41.6% and 6.5% in G1 and G2, respectively. In conclusion, the animals were stimulated in part in humoral immune response, however, gave encouragement to the cellular immune response both locally and systemically