Perfil de suscetibilidade antimicrobiana e avaliação molecular da resistência à quinolonas de cepas de salmonella epidêmicas e de origem avícola isoladas entre 1999 e 2006 no Estado do Paraná, Brasil

Foram avaliadas 212 cepas epidêmicas de Salmonella spp. isoladas de pacientes e alimentos entre 1999 e 2006 no Estado do Paraná, além de 19 cepas de origem avícola. Dentre as cepas provenientes de surtos 16 diferentes sorovares foram identificados, sendo que Enteritidis foi o mais freqüentemente isolado, presente em 174 amostras (82%), seguido por sete cepas de S. Infantis (3,3%), seis de S. Typhimurium (2,8%) e seis de S. Derby (2,8%). O perfil de suscetibilidade a aos antimicrobianos revelou que dentre as cepas epidêmicas, 95 (45%) apresentaram resistência ao ácido nalidíxico, uma (0,5%) à ampicilina e uma (0,5%) ao sulfametoxazol-trimetoprim. Todas as cepas foram suscetíveis à cefotaxima, cloranfenicol e ciprofloxacina. No período estudado, houve um aumento de 15% para 62,5% na resistência ao ácido nalidíxico e foi observada uma elevação no valor do MIC50 para ciprofloxacina nas cepas avaliadas. A concentração inibitória mínima de ciprofloxacina (CipMIC) foi maior para as cepas resistentes do que para as cepas sensíveis ao ácido nalidíxico. Adicionalmente, durante o período estudado, foi constatada uma tendência crescente no isolamento de cepas epidêmicas com suscetibilidade reduzida a ciprofloxacina (MIC> 0,125µg/mL). Na avaliação do perfil de resistência das cepas de origem avícola, 13 (68,4%) foram resistentes ao ácido nalidíxico. A ocorrência de mutações na Região Determinante de Resistência as Quinolonas (QRDR) do gene gyrA foi avaliada através da técnica de AS-PCR-RFLP nas 95 cepas de Salmonella spp. resistentes ao ácido nalidíxico envolvidas em surtos e 13 cepas de origem avícola. Os perfis de RFLP das cepas epidêmicas evidenciaram a presença de mutações nos códons Asp87 (63%) e Ser83 (37%). Dentre as cepas de origem avícola, 11 (84,6%) apresentaram mutações nos códons Asp87 (54,5%) ou Ser83 (45,5%) do gene gyrA. Em duas cepas avícolas de Salmonella fenotipicamente resistentes ao ácido nalidíxico e com suscetibilidade reduzida à ciprofloxacina, não foram identificadas quaisquer mutações no gene gyrA, sugerindo a ocorrência de outros mecanismos de resistência. Não foram identificadas duplas mutações no gene gyrA. A posição do ponto de mutação foi associada à variação dos níveis de resistência à ciprofloxacina. Cepas com mutação no códon 83 foram mais resistentes que aquelas com mutação no códon 87. Não foi observada mutação no códon Gly81 em nenhuma das cepas avaliadas. A elevada incidência de cepas de Salmonella resistentes ao ácido nalidíxico e com suscetibilidade reduzida à ciprofloxacina que apresentam mutações no gene gyrA observada no presente estudo alerta para o uso criterioso de fluoroquinolonas, evitando a emergência de cepas resistentes.The present study was carried out to evaluate the antimicrobial susceptibility of 19 Salmonella strains from poultry and 212 Salmonella strains associated to foodborne outbre aks occurred inParana State between 1999 and 2006. A total of 16 different Salmonella serovars was identified among the epidemic isolates. Enteritidis was the most frequently serovar which was identified in 174 samples (82%) followed by S. Infantis (3,3%), S. Typhimurium (2,8%) and S. Derby (2,8%). Ninety five (45%) epidemic strains were nalidixic acid resistant, one (0,5%) was resistant to ampicillin and one (0,5%) to trimethoprim. All analyzed strains were susceptible to cefotaxim, chloramfenicol and ciprofloxacin. An increase in nalidixic acid resistance from 15.0% to 62.5% and in ciprofloxacin MIC50 values was observed during the period of study. The ciprofloxacin minimal inhibitory concentration (CipMIC) was higher for resistant nalidixic acid strains than for the susceptible ones. Also, an increase in isolation of epidemic Salmonella strains with reduced susceptibility (MIC> 0,125µg/mL) to ciprofloxacin was observed. Thirteen (68.4%) of the analyzed poultry strains were nalidixic acid resistant. Epidemic (n= 95) and poultry strains (n= 13) resistant to nalidixic acid were analyzed by AS-PCR-RFLP method in order to determine the presence of mutations in QRDR region of gyrA gene. RFLP patterns of epidemic strains showed mutations at codons Asp87 (63%) and Ser83 (37%). Among isolates of poultry, 11 (84.5%) showed mutations at codons Asp87 (54.5%) and Ser83 (45.5%). Any mutations at the QRDR r egion of gyrA gene were detected in two strains resistant to nalidixic acid but other molecular resistance mechanisms could be involved. No double mutations were observed in the analyzed strains. The position point mutation was associated with different levels of ciprofloxacin resistance. Strains with Ser83 mutation showed higher resistance than strains with Asp87 mutation. No mutations were observed in codon Gly81. The high prevalence of Salmonella strains resistant to nalidixic acid and mutation points in gene gyrA alerts for the rational use of fluoroquinolone in order to avoid emergence of resistance