Caracterização bioquímica e imunológica de subfrações de antígeno de alta massa moleclar de Pasracoccidioides brasiliensis

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica progressiva causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. As diferentes formas clínicas da doença estão associadas com vários graus de supressão da imunidade celular dependendo da ativação preferencial de Th1 ou Th2. Objetivo deste trabalho foi caracterizar sub-fração de antígeno de alta massa molecular (hMM) de P. brasiliensis, assim como, avaliar a resposta imune humoral e celular a este componente. Inicialmente a fração de hMM (~380 kDa) foi obtida por cromatografia em coluna de Sephadex G-200 e a seguir tratada papaína. A fração de hMM sem tratamento e tratada com papaína foi submetida a Cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). As frações foram analisadas por dot blotting/ELISA/western blotting utilizando pool de soros de pacientes com PCM e a seguir avaliada a resposta imune humoral e celular as frações antigênicas em paracoccidiodidomicose experimental em camundongos Balbc. Determinou-se também a concentração de IL-10, IL-4 e INF-g em sobrenadantes de linfócitos de camundongos estimulados com a fração de hMM e sub componente. Os resultados obtidos demonstraram que a fração de hMM de ~380 kDa pode gerar componentes de MM aproximadamente de ~70kDa e de ~27 kDa, sendo a de 70 kDa com capacidade de interagir com soros de pacientes com PCM. Tanto a fração ~380 kDa como sub-fração de ~ 70 kDa induziram resposta linfoproliferativa, com aumento de INF-g, IL-10 e não de IL-4. Concluímos pelo trabalho que as frações de ~380 kDa e de ~70 kDa são antigênicas e apresentam a capacidade de induzir resposta imune celular possivelmente induzindo a ativação da resposta do tipo Th1.Paracoccidioidomycosis (PCM) is a progressive systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. The different clinical forms of the disease are associated with various degrees of suppression of cellular immunity, depending on the preferential activation of Th1 or Th2. The objective of this investigation was to characterize sub-fraction the antigen high-molecular-mass (hMM) component of P. brasiliensis, as well as to asses the humoral and cellular immune response to this component. Initially the hMM fraction (~380 kDA) was obtained by chromatography on a Sephadex G-200 column, and was then treated with papain. The untreated hMM fraction and the papain treated fraction were chromatographed on a high-preformance liquid column (HPLC). The fraction were analysed by dot blotting/ELISA/western blotting using pooled sera from PCM patients, followed by assessment of the humoral and cellular response to the antigenic fractions in experimental paracoccidioidomycosis in Balbc mice. The concentrations of IL-10, IL-4 and INF-g in supermatants of lymphocytes of mice stimulated with the hMM fraction and subcomponents were also determined. The results obtained showed that the hMM fraction of ~380 kDa could generate MM components of approximately ~70 kDa and ~27 kDa. The 70 kDa component interacted with sera from PCM patients. Both the ~380 kDa fraction and the ~70 kDa subfraction induced a lymphoproliferative response, with increases in INF-g and IL-10 but not in IL-4. From these data we conclude that the ~380 kDa abd ~70 kDa fractions are antigenic and capable of inducing a cellular immune response, possibly inducing activation of the Th1 type response