Atividade antiviral e modo de ação de um peptídeo 6 kDa isolado de Helianthus annus L e sinergismo com Aciclovir

HSV-1 está geralmente associado a infecções faciais, oftálmicas e genitais. Sua grande característica está em causar uma lesão primária, auto-limitante em pacientes imunocompetentes, que é capaz de reativar por toda a vida do paciente. Eventualmente, pode estar associado a lesões graves no sistema nervoso central, como encefalites necrosantes agudas e meningites, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Muitos tratamentos são baseados no uso de aciclovir e em outros análogos de nucleosídeos, mas eles são tóxicos e alguns pacientes com lesões recorrentes podem albergar cepas resistentes. No presente estudo foi isolado um peptídeo anti-HSV-1 das sementes de girassol (Helianthus annus) utilizando técnicas cromatográficas. A caracterização parcial do peptídeo revelou que ele apresenta aproximadamente 6 kDa e que possivelmente seja aniônico. A atividade antiviral contra HSV-1 foi investigada através de vários experimentos, entre eles estão a determinação do modo de ação, pela adição do peptídeo em várias etapas do ciclo replicativo do HSV-1; pelo ensaio de penetração e pelo sinergismo utilizando aciclovir. O peptídeo mostrou-se altamente eficiente ao impedir as etapas iniciais do ciclo replicativo, a adsorção e penetração, o que pode ser comprovado pelos valores de IC50, 5,3 μg/ml quando o peptídeo foi adicionado antes da infecção por HSV-1 e 4,5 μg/ml quando adicionado durante a infecção por HSV-1. Atividade virucida moderada foi observada quando o peptídeo foi incubado com o HSV-1 por 1 h a 37 ºC antes da infecção (IC50 igual a 78,6 μg/ml), enquanto que o peptídeo se mostrou inativo depois que a infecção viral estivesse estabelecida. 5 μg/ml do peptídeo impediu 86 % da penetração viral durante os primeiros 20 minutos de incubação. Através do isobolograma, pode-se verificar que o peptídeo apresentou sinergismo quando associado ao aciclovir, com índice de concentração fracional inibitória (FICI) de 0,375.HSV-1 is generally associated whit primary and recurrent mucocutaneous facial, ophthalmic or genital lesions, but under certain conditions, can produce serious infections of the central nervous system, causing acute necrotizing encephalitis end meningitis in patients with immunedeficiencies. Most of the treatments for HSV-1 are based on acyclovir (ACV) and ACV-like nucleosides analogues, but they are toxic and some immunocompromised patients with recurrent HSV lesions develop resistance to ACV. In this study was isolated an anti-HSV-1 peptide of sunflower seeds (Helianthus annus) by chromatografic techniques. The partial characterization revealed that it presents 6 kDa approximately and possibly is anionic. The activity antiviral against HSV-1 was investigated through several experiments, among them they are the determination in the action way, for the addition of peptide in several stages of the HSV-1 replication cycle; by penetration assay and synergism using acyclovir. The peptide was shown highly efficient in blocking the initial stages of the replication cycle, the adsorption and penetration, this can be proven for the values of IC50, 5.3 μg/ml when the peptide was added before the infection by HSV-1 and 4.5 μg/ml when added during the infection by HSV-1. Activity moderate virucidal was observed when the peptide was incubated with HSV-1 by 1 h to 37 ºC before the infection (IC50 equal to 78.6 μg/ml), while the peptide was shown inactive after the infection viral was established. 5 μg/ml of the peptide was impeded 86 % of the penetration viral from first 20 minutes of incubation. Through the isobologram, it can be verified that the peptide was presented synergism when associate to acyclovir