Regulação da produção de subtilisinas pelo fungo entomopatogênico Beauveria bassiana

As proteases extracelulares tem sido demonstradas como determinantes de virulência na patogenicidade dos fungos contra insetos. Neste estudo foi analisada a produção de protease tipo-subtilisina (Pr1) por Beauveria bassiana CG425, que é um fungo de interesse para o controle do gafanhoto Rhammatocerus schistocercoides. Para entender o papel de Pr1 durante a infecção de R. schistocercoides foi analisado a secreção desta protease durante o crescimento do fungo em meio contendo nitrato e meio contendo a cutícula. Foi observado um aumento da produção de Pr1 em meio contendo cutícula. As análises de PCR em tempo real revelaram que o nível de expressão relativa de Pr1Bb em 12 horas de incubação no meio contendo a cutícula, foi aproximadamente 32 vezes superior ao observado no meio contendo nitrato. Em meio mínimo contendo metionina (0,5%) um alto nível de Pr1 também foi observado. Nestas condições os níveis transcricionais de Pr1Bb foi aproximadamente 6 vezes superior em relação ao meio contendo nitrato. Além disso, no meio suplementado com cutícula de gafanhoto, a adição de metionina numa concentração de 0,75% reprimiu a produção desta protease e a expressão de Pr1Bb. Os resultados obtidos demonstraram que o gene Pr1Bb é regulado por componentes da cutícula de R. schistocercoides e pelo aminoácido metionina. Neste estudo foi demonstrado, pela primeira vez, os níveis transcricionais do gene Pr1 de B. bassiana na presença da cutícula de R. schistocercoides, ampliando o conhecimento sobre a regulação da produção de Pr1 por este fungo.Extracellular proteases have been shown to be virulence factors in fungal pathogenicity towards insects. We examined the production of extracellular subtilisinlike protease (Pr1) by Beauveria bassiana CG425, which is a fungus of interest for the control of the grasshopper Rhammatocerus schistocercoides. To access the role of Pr1 during infection of R. schistocercoides we analyzed its secretion during fungus growth in either in nitrate-medium or in cuticle-containing medium. An enhancing effect of cuticle on Pr1 production was observed. Real-time PCR assay revealed that the relative expression level of Pr1Bb in 12 h post-incubation in cuticle-containing medium was approximately 32-fold greater than in nitrate-containing medium. In minimal medium containing methionine (0.5%) a high level of Pr1 was also observed. In this culture condition the transcript levels of Pr1Bb was approximately 6-fold greater than in nitrate-containing medium. Moreover, in medium supplemented with grasshopper cuticle, the addition of methionine at a concentration of 0.75% repressed protease production and Pr1Bb expression. The results obtained have demonstrated that Pr1Bb gene is regulated by R. schistocercoides cuticle components and by the amino-acid methionine. In this study, we showed for the first time the transcription levels of B. bassiana Pr1 gene in the presence of R. schistocercoides cuticle, extending our knowledge about regulation of Pr1 production in this fungus