Caracterização fenotípica e molecular de fatores de virulência de Enterococcus faecium de origem hospitalar

Enterococos são cocos Gram-positivos comumente encontrados no trato gastrintestinal de humanos e animais bem como no solo, água e alimentos. Entretanto, eles estão atualmente entre as maiores causas de infecções hospitalares. Enterococo resistente a vancomicina (ERV) foi primeiramente identificado no final da década de 1980 em alguns países europeus. Os genes que codificam os seis tipos de resistência adquirida a vancomicina são tipicamente associados com elementos genéticos móveis. Muitos fatores de virulência foram descritos em enterococos, mas pouco se conhece a respeito da virulência de Enterococcus faecium. No presente estudo, quarenta isolados de E. faecium resistente a vancomicina (EFRV) obtidos de diferentes fontes no Hospital Universitário de Londrina, Paraná foram pesquisados quanto aos fatores de virulência putativos codificados pelos genes cylA, efaA, gelE e esp e seus genótipos de resistência. Esses isolados foram obtidos de pacientes hospitalizados (18 colonizantes e 12 pacientes com infecção enterocócica) e do respectivo ambiente vicinal (n=10). A resistência a vancomicina foi comum para todos os isolados e eles apresentaram o gene vanA. O perfil de sensibilidade aos antimicrobianos foi analisado por método de microdiluição automatizado. A ocorrência de uma alta freqüência de resistência múltipla aos antimicrobianos foi detectada entre esses isolados e esse fenótipo foi independente da origem dos mesmos. Os fatores de virulência foram investigados por métodos moleculares e fenotípicos. A prevalência dos genes de virulência foi a seguinte: esp (87,5%), efaA (82,5%), gelE (70%) e cylA (65%). Todos os isolados apresentaram pelo menos um marcador putativo de virulência e a presença de quatro genes foi observada em 32,5% dos isolados. Somente a presença do gene gelE foi significativamente mais alta em colonizantes e isolados de infecção em comparação aos isolados de ambiente. Além disso, a presença do gene efaA mostrou associação com a presença do gene esp, independente da origem dos isolados. Foi observada uma associação positiva entre a presença do gene cylA e atividade hemolítica no ensaio em agar-sangue de carneiro. Contrariamente, nenhuma associação foi encontrada tanto para o gene gelE e a produção de gelatinase no ensaio em placa como para o gene esp e a formação de biofilme em superfície de poliestireno. Esses resultados mostraram a potencial virulência de E. faecium hospitalar multirresistente isolado de diferentes fontes e o conhecimento acerca do seu papel na patogênese pode contribuir para o desenvolvimento de novas estratégias de combate a infecções enterocócicas.Enterococci are Gram-positive cocci commonly found in the gastrointestinal tract of humans and animals as well as in soil, water and food. However, they are now among the leading causes of nosocomial infections. Vancomycin-resistant enterococci (VRE) were first identified in the late 1980s in a few European countries. The genes that encode the six types of acquired vancomycin resistance are typically associated with mobile genetic elements. Several virulence factors were described for enterococci, but little is known about the virulence of Enterococcus faecium. In the present study, forty E. faecium vancomycin-resistant (VREF) isolated from different sources at the University Hospital of Londrina, Paraná were examined for the putative virulence factors encoded by cylA, efaA, gelE and esp genes and their resistance genotype. These isolates were recovered from hospitalized patients (18 colonizers and 12 enterococci-infected patients) and their environment vicinity (n = 10). Resistance to vancomycin was common to all isolates and they harbored the vanA gene. Antimicrobial susceptibility profile was analyzed by automated microdilution method. The occurrence of a high frequency of multiple antimicrobial-resistance was detected among these isolates and this phenotype was independent of the origin from they were recovered. The virulence factors were investigated by molecular and phenotypic methods. The prevalence of the virulence genes was as follows: esp (87.5%), efaA (82.5%), gelE (70%) and cylA (65%). All isolates harbored at least one putative virulence marker and the presence of four genes was observed in 32.5% isolates. Only the presence of gelE gene was significantly higher in colonizers and infection-isolates compared to environmental isolates. In addition, the presence of efaA gene was associated with the presence of the esp gene, independent of the origins of the isolates. A positive association between the presence of cylA gene and hemolytic activity on sheep blood agar assay was observed. In contrast, no association was found either for gelE gene and gelatinase production on agar plate assay or for esp gene and biofilm formation on polystyrene surface. These results showed the potential virulence of nosocomial multiple-resistant E. faecium isolated from different sources and the knowledge about the role of them on its pathogenesis can contribute to develop new strategies for enterococci infection combat