Efeitos sistêmicos da contaminação por Desoxinivalenol, Fumonisina B e sua associação em suínos

Com o objetivo de avaliar os efeitos sistêmicos da contaminação por micotoxinas, enfatizando aspectos imunológicos e morfológicos, dois experimentos foram realizados. No primeiro experimento, 24 leitões de 5 semanas de idade foram divididos em 4 grupos, cada um recebendo dieta controle, dieta contaminada com 2,8 mg/Kg DON ou 5,9 mg/Kg FB ou 6,5 mg/Kg DON+FB. Os animais foram imunizados com ovalbumina no 4º e 16º dia e amostras de sangue foram coletadas. Após 35 dias, os animais foram eutanasiados. Amostras de tecidos foram coletadas e fixadas em formol 10% e em nitrogênio líquido a -80ºC. Com as amostras de sangue, realizaram-se exames hematológicos, bioquímicos e imunológicos. As amostras de tecidos fixadas em formol 10% foram submetidas a processamento histológico e imunoistoquímico, enquanto que as amostras congeladas foram submetidas a Western Blot e PCR para avaliação da expressão de proteínas de junção e citocinas. No segundo experimento foram utilizados dois modelos experimentais. No modelo in vivo, 24 leitões de 4 semanas de idade foram distribuídos em 2 grupos. Durante 28 dias, um grupo recebeu dieta controle e o outro dieta contaminada com 2,3 mg/Kg DON. Ao término do experimento, seis animais de cada grupo foram eutanasiados e amostras de jejuno e íleo foram coletadas e fixadas em formol a 10% e em nitrogênio líquido a -80ºC. Para realização do modelo ex vivo foram eutanasiados seis animais de 4 semanas de idade para a obtenção dos explantes jejunais, os quais foram expostos a 5 e 10µmol/L de DON durante 4 horas, sob agitação constante a 39ºC. Após a incubação, estes foram fixados em formol 10% ou nitrogênio líquido a -80ºC. Com as amostras obtidas nos 2 modelos experimentais foram realizadas as técnicas de Western Blot e histopatologia, para avaliação da expressão de MAPK’s e morfologia intestinal. A ingestão de dietas contaminadas com 2,8 mg/Kg de DON induziu ao aumento da expressão de citocinas de jejuno e íleo, enquanto que a ingestão de dietas contaminadas com 5,9 mg/Kg de FB aumentou a expressão de citocinas no íleo. Nos animais que ingeriram dietas contaminadas com 6,5 mg/Kg DON+FB houve uma diminuição na resposta imune sistêmica. Alterações morfológicas em fígado, pulmão, rins e intestinos foram observadas em animais que ingeriram as micotoxinas de forma isolada ou em associação. A expressão das proteínas de junção E-caderina e Ocludina diminuiu significativamente nos animais que ingeriram dietas contaminadas com 2,8 mg/Kg DON e 6,5 mg/Kg DON+FB. No segundo experimento, os dados obtidos no modelo ex vivo demonstraram a capacidade de DON, nas doses de 5 e 10 µmol/L, de provocar lise de enterócitos, edema intersticial e fusão de vilosidades. Em ambos os modelos experimentais, verificou-se que DON ativou a expressão das MAPK’s p44/42 ERK ½ e phospho p38, não sendo observada a ativação de SAPK/JNK. Em conclusão, os dados obtidos indicam que a ingestão de dietas mono ou co-contaminadas induziram alterações morfológicas e imunológicas que podem predispor os animais a infecções secundárias.Two experiments were conducted in order to evaluate the systemic effects of mycotoxin contamination, emphasizing morphological and immunological aspects. In the first study, 24 5-week-old piglets were divided into four groups, each group receiving a diet: one diet negative control and 3 diets contaminated with 2.8 mg/Kg DON, 5.9 mg/Kg FB and 6.5 mg/Kg DON + FB respectively. The animals were immunized with ovalbumin on the 4th and 16th days and blood samples were collected. After 35 days, the animals were euthanized. Tissue samples were collected and fixed in 10% formalin and in liquid nitrogen at -80 °C. The blood samples were used in hematological, biochemical and immunological tests. The tissue samples fixed in formaldehyde 10% were subjected to histological and immunohistochemical processing while the frozen samples were subjected to Western Blot and PCR to evaluate the expression of junction proteins and cytokines. In the second experiment, an in vivo study, twenty four 4-weeks-old piglets were distributed into two groups. For 28 days, one group received a control diet and the other a diet contaminated with 2.3 mg/Kg DON. At the end of the experiment, six animals from each group were euthanized. Samples of jejunum and ileum were collected and fixed in 10% formalin and in liquid nitrogen at -80°C. Using the ex vivo model , six 4-week-old animals were euthanized to obtain jejunal explants, which were exposed to 5 and 10μmol/L of DON for 4 hours, under constant stirring at 39°C. After incubation, these were fixed in 10% formalin and in liquid nitrogen at -80°C. The samples obtained from the two experimental models were analyzed with western blot techniques and histopathology, to evaluate the expression of MAPK's and intestinal morphology. Ingestion of diets contaminated with 2.8 mg /Kg DON induced increased expression of cytokines in the jejunum and ileum, whereas the intake of diets contaminated with 5.9 mg/Kg FB increased the expression of cytokines in the ileum. In animals fed diets contaminated with 6.5 mg/Kg DON + FB there was a decrease in systemic immune response. Morphological changes in liver, lung, kidneys and intestines were observed in animals fed mycotoxins in isolation or in combination. The expression of junction protein e-cadherin and ocludin decreased significantly in animals fed diets contaminated with 2.8 mg/Kg DON and 6.5 mg/Kg DON + FB. In the second experiment, the data obtained in the ex vivo model demonstrated the ability of DON, at doses of 5 and 10 μmol/L, to cause lysis of enterocytes, interstitial edema and fusion of villi. In both experimental models, it was observed that DON activated the expression of MAPK’s p44/42 ERK ½ and phospho p38, with no observed activation of SAPK/JNK. In conclusion, these data indicate that intake of mono or co-infected diets induced morphological and immunological changes that may predispose animals to secondary infections