Análise molecular de fungos da seção Flavi isolados de castanha-do-brasil

A castanha-do-brasil é o principal produto extrativista comercializado dos estados do norte do Brasil. Entretanto, a ocorrência de fungos e aflatoxinas na castanha-do-brasil têm ocasionado grandes perdas econômicas. As aflatoxinas são micotoxinas produzidas, preponderantemente, por espécies de Aspergillus seção Flavi. A identificação das espécies da seção Flavi por métodos tradicionais, aliada ao uso de métodos moleculares, está somando conhecimentos e estabelecendo maior eficiência na caracterização de isolados. Diante deste contexto, este trabalho teve por objetivo, através de métodos moleculares, ampliar os conhecimentos acerca das espécies de Aspergillus da seção Flavi que contaminam com aflatoxinas este importante produto extrativista da região norte do Brasil. Para tanto, foi realizada uma análise de Polimorfismos de DNA Amplificado ao Acaso (RAPD) de 81 isolados de Aspergillus seção Flavi, obtidos de amêndoa e casca de castanha-do-brasil, provenientes dos estados do Amazonas e Pará. A partir dos fingerprints de DNA gerados os isolados de amêndoa foram subdivididos em 6 grupos e os de casca em 7 grupos. O sequenciamento de porções dos genes que codificam para β-tubulina e calmodulina, de representantes de cada grupo obtido pelo RAPD, permitiu identificar espécies filogeneticamente relacionadas: A. flavus, A. nomius, A. bombycis, A. arachidicola, A. tamarii e A. caelatus. Os dados moleculares também sugeriram a existência, tanto em amêndoas como em cascas, de uma espécie ainda não descrita na literatura. Além disso, foram investigadas possíveis deleções no cluster gênico da aflatoxina em isolados de A. flavus não produtores de aflatoxinas, através de PCR específica. Foram observados seis padrões de deleção do cluster gênico, mostrando que a deleção no cluster da aflatoxina não é rara e os padrões podem ser diversos.The Brazil-nut is the main extractive product commercialized in the states of northern Brazil. However, the occurrence of fungi and aflatoxins in Brazil nuts has caused major economic losses. Aflatoxins are mycotoxins produced mainly by species of Aspergillus section Flavi. The identification of species from section Flavi by traditional methods associated with the use of molecular methods is adding knowledge and providing greater efficiency in the characterization of isolates. Given this context, this study aimed, through molecular methods, to expand knowledge about the species of Aspergillus from section Flavi that contaminate with aflatoxins this important extractive product of the north region of Brazil. To this end, we performed an analysis of random amplified polymorphic DNA (RAPD) of 81 isolates of Aspergillus section Flavi, obtained from almond and shell in Brazil nuts from the states of Amazonas and Pará. From the fingerprints of DNA generated, the nut isolates were subdivided into six groups and the shell in 7 groups. The sequencing of portions of the genes coding for β-tubulin and calmodulin, representatives of each group obtained by RAPD, identified phylogenetically related species: A. flavus, A. nomius, A. bombycis, A. arachidicola, A. tamarii and A. caelatus. The molecular data also suggested the existence, in both almonds and shells, a specie not yet described in literature. Furthermore, we investigated possible deletions in the gene cluster of aflatoxin in nonaflatoxigenic A. flavus isolates, using specific PCR. Were observed six deletion patterns in the aflatoxin gene cluster, showing that the deletions in the cluster of aflatoxin are not rare and the patterns appear to be diverse