Receptor Toll-like 3 : possível imunomodulação através de RNA e implicações no microambiente do câncer de mama

A investigação dentro da imunologia envolvendo RNA tem sido amplamente explorada com o reconhecimento da existência do receptor Toll like 3 (TLR3) o qual interage com RNAs de origem viral. TLR3 reconhece RNA dupla fita, como por exemplo RNA poly (I:C), um análogo sintético de RNA dupla-fita (RNAds) viral e sua estimulação resulta na liberação de citocinas e quimiocinas proinflamatórias. É conhecido que RNAds, além de desencadear a sinalização em cascata para produção de citocinas, como interferons (INFs), também ativa enzimas induzidas por INF, incluindo proteína quinase dependente de RNA (PKR). No presente estudo foi investigada a expressão relativa de RNAm para TLR3, CXCR4, IFNγ e PKR em culturas de células sensibilizadas com poli (I:C) e RNA endógeno proveniente de células mononucleadas do sangue periférico (PBMC) humano. Não foi observado efeito citotóxico e aumento na proliferação de células CD3+, CD4+ e CD8+. Houve aumento da expressão relativa de RNAm de TLR3, IFNy, CXCR4 e PKR em cultura de PBMC com poli (I:C). Embora tenha sido observado que TLR3 reconhece RNAds sintético e ativa genes que aumentam as citocinas inflamatórias importantes para a interação das células imunes, a função fisiológica do TLR3 permanece a ser elucidada. Interessantemente, a cultura de células sensibilizadas com RNA endógeno autólogo apresentou diminuição da expressão de RNAm de TLR3, IFNy, CXCR4 e PKR. É possível que os RNAs endógenos como microRNAs e RNAs longos, não codificadores, através de suas complexas estruturas secundárias participem na regulação da expressão gênica independente do TLR3. É conhecido que TLRs são expressos não somente pelas células do sistema immune, mas também por células tumorais e que IFNy pode ser uma citocina chave na resposta imune antitumoral. A próxima etapa do presente trabalho foi investigar a expressão de RNAm de TLR3, IFNy e CXCR4 por PCR em tempo real, em tecido mamário tumoral das pacientes com câncer de mama (carcinoma ductal) comparado com tecido mamário saudável. Embora não tenha sido verificada diferença significante entre o tecido mamário saudável e tecido mamário tumoral quanto à expressão de TLR3, houve aumento estatisticamente significante da expressão do TLR3 no tecido mamário tumoral de pacientes sem acometimento de linfonodos. Foi verificada correlação positiva da expressão de RNAm para TLR3 e IFNy e também para TLR3 e CXCR4, portanto é possível que estas moléculas tenham implicações na patogênese do câncer. A etiologia do câncer de mama tem sido muito discutida, variáveis como predisposição genética, idade e ambiente são comprovadamente fatores de risco, porem não são absolutos e únicos. Alguns vírus, devido a sua complexidade na estrutura e mecanismo de ação, são considerados agentes etiológicos de algumas neoplasias, como câncer de colo de útero, câncer de mama, linfoma e leucemias. O vírus do tumor mamário de camundongos (MMTV) tem sido sugerido como candidato a vírus causador de câncer de mama. É provável que algumas pacientes com câncer de mama possam apresentar envolvimento viral e que o TLR3 possa ser um receptor envolvido na resposta imune como também num processo carcinogênico na mama. A participação do RNA na patogênese da doença e suas implicações na modulação da resposta imune como também na terapêutica é um tema a ser elucidado.The research of immunology involving RNA has been widely exploited with the recognition of Toll like receptor 3 (TLR3) which interacts with viral RNAs. TLR3 recognizes double stranded RNA such as RNA poly (I: C), a synthetic analogue of double-stranded RNA (RNAds) virus and its stimulation results in release of proinflammatory cytokines and chemokines. It is known that RNAds, besides triggerring the cascade signalization for the production of cytokines such as interferons (INFs), also activates enzymes induced by INF, including RNA-dependent protein kinase (PKR). This study investigated the relative expression of mRNA for TLR3, CXCR4, IFNg and PKR in sensitized cultured cells with poly (I: C) and endogenous RNA from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) human. No cytotoxic effect or increased proliferation of CD3+, CD4+ and CD8+ were observed. There was an increased mRNA expression for TLR3, IFNy, CXCR4 and PKR in cultured PBMC with poly (I: C). Although it was observed that TLR3 recognizes dsRNA synthetic and activates genes that increase the inflammatory cytokines important for the interaction of immune cells, the physiological function of TLR3 remains to be elucidated. Interestingly, the cultured cells sensitized with endogenous RNA exhibited reduced mRNA expression of TLR3, INFy, CXCR4 and PKR. It is possible that endogenous RNAs such as microRNAs and long RNAs, not coders, through their complex secondary structures are involved in regulating gene expression independent of TLR3. It is known that TLRs are expressed not only by cells of the immune system but also by tumor cells and that IFNy can be a key cytokine in anti-tumor immune mechanism. The next step of this study was to investigate mRNA expression of TLR3, IFNy and CXCR4 by real time PCR in breast tumor tissue of patients with breast cancer (ductal carcinoma) compared with normal breast tissue. Although no significant difference was found between normal tissue and breast in the expression of TLR3, there was a statistically significant increase in the expression of TLR3 in tumor breast tissue of patients without lymph node involvement. It was found positive correlation between mRNA increase for TLR3 e IFNy and too TLR3 and CXCR4, so it is possible to involvement the increase of mRNA expression for TLR3 and IFNy that these molecules have implications in the pathogenesis of cancer. The etiology of breast cancer has been much discussed, variables such as genetic predisposition, age and environment are proved risk factors, but are not absolute and unique. Some viruses, due to its complexity in structure and mechanism of action, are considered etiologic agents of some malignancies such as cervical cancer, breast cancer, lymphoma and leukemia. The mammary tumor virus of mice (MMTV) has been suggested as a candidate for the virus that causes breast cancer. Therefore, it is reasonable to assume that some patients with breast cancer may have viral involvement and that TLR3 may be a receptor involved in immune response but also a carcinogenic process in breast. Involvement of nucleic acid in the pathogenesis of the disease and its implications in the modulation of immune response in therapy is an issue to be elucidated