Peroxidase in unripe and ripe star fruit (Oxalidacia Averrhoa) in different stages of maturation

A peroxidase (EC. 1.11.1.7) solúvel e ionicamente ligada foi extraída da carambola em diferentes estádios de maturação da fruta. Os extratos foram preparados utilizando solução tampão fosfato de sódio 100 mM e pH 7,0 e determinada a atividade enzimática desses extratos. O grau de maturação não influenciou na atividade da peroxidase solúvel, no entanto foram observadas algumas modificações na atividade da peroxidase ligada ionicamente. Para o estudo da estabilidade térmica da peroxidase, os extratos brutos foram submetidos a temperaturas de 60, 65, 70, 75, 80 e 85°C e a atividade enzimática determinada em intervalos de 0, 2, 4, 6, 8 e 10 minutos. Foi observado que a enzima perdia sua atividade à medida que se aumentava o tempo e a temperatura. Na fase de purificação, o extrato concentrado da peroxidase solúvel foi dialisado usando solução tampão 10 mM de fosfato de sódio pH 7,0, em seguida a amostra foi aplicada em coluna cromatográfica (16 mm d.i x 70 cm) empacotada com Sephacryl HS100 com velocidade de fluxo de 30 mL/h. Os resultados da eletroforese mostraram a presença de uma isoenzima aniônica de peso molecular 64 kDa.The soluble and ionically bound peroxidase (EC. 1.11.1.7) was extracted from the star fruit in different stages of maturation. The extracts were prepared using solution 100 mM sodium phosphate buffer at pH 7.0 and the enzymatic activity of those extracts was measured. The maturation degree did not influence the soluble peroxidase activity; however, some changes were observed in the activity for the ionic bound peroxidase. For the study of peroxidase thermal stability, the crude extracts were submitted to temperatures of 60, 65, 70, 75, 80 and 85°C and the enzymatic activity was carried out at intervals of 0, 2, 4, 6, 8 and 10 minutes. It was observed that the enzyme lost activity with increasing time and temperature. For purification, the concentrated extract of the soluble peroxidase was dialysed, using a solution of 10mM of the sodium phosphate buffer pH 7.0, after the sample was applied in a chromatographyc column (16 mm i.d x 70 cm) packed with Sephacryl HS100 with flow rate of 30 mL/h. The electrophoresis results showed the presence of an anionic isoenzyme with 64kDa MW