Hystological and biochemical aspects of the resistance induction in bean plants and antifungical activity by Pycnoporus sanguineus extracts

Um dos enfoques da agricultura alternativa à o controle alternativo de doenÃas, o qual inclui o controle biolÃgico, a induÃÃo de resistÃncia em plantas e o uso de produtos naturais com atividade antimicrobiana e/ou indutora de resistÃncia. Extratos de basidiocarpos tÃm sido estudados no controle de doenÃas. Este trabalho teve como objetivos avaliar o efeito fungitÃxico dos extratos aquosos de micÃlio (EAM), basidiocarpo (EAB) e filtrado de cultura (EAF) de Pycnoporus sanguineus, sobre Colletotrichum lindemuthianum; e avaliar o controle da antracnose em feijoeiro por estes extratos, bem como a induÃÃo de resistÃncia pela determinaÃÃo da atividade das enzimas peroxidase (POX), polifenoloxidase (PFO), fenilalanina amÃnia-liase (FAL) e β-1,3 glucanase; alÃm de detecÃÃo in situ das espÃcies reativas de oxigÃnio (EROâs) H2O2 e O2-. Para os ensaios in vitro foram utilizados os extratos nas concentraÃÃes 1, 5, 10, 15 e 20%, avaliando-se o crescimento micelial e germinaÃÃo de esporos de C. lindemuthianum. Para os ensaios de severidade e determinaÃÃo das enzimas, extratos nas concentraÃÃes 5 e 10% foram aplicados nas 1as folhas trifoliadas de feijoeiro, trÃs dias antes da inoculaÃÃo do patÃgeno (1x104 conÃdios mL-1) realizada nas 1as e 2as folhas. O mesmo procedimento foi adotado para detecÃÃo das EROâs, porÃm utilizados apenas EAM e EAB 5%. Ãgua, acibenzolar-S-metil (75 mg i. a. L-1) e fungicida azoxystrobin (4 g i. a. L-1) foram utilizados como tratamentos controle para todos os ensaios. Para a dosagem das enzimas foram amostradas as 1as e 2as folhas no momento dos tratamentos e apÃs 3, 6, 9, 12 e 27 dias. Para EROâs foram feitas avaliaÃÃes Ãs 48, 96 e 192 h apÃs inoculaÃÃo. Os resultados indicaram atividade antimicrobiana direta dos extratos, tendo estes inibido a germinaÃÃo, porÃm nÃo apresentaram efeito inibitÃrio do crescimento micelial. Nas plantas, os EAF 5 e 10%, reduziram 69 e 67%, respectivamente, a severidade nas 1as folhas, enquanto o fungicida e ASM reduziram 87 e 76%, respectivamente. Nas 2as folhas as maiores reduÃÃes foram observadas para EAB 10% e EAF 5 e 10%, com reduÃÃo mÃdia da severidade de 63%. Esta reduÃÃo na severidade pode estar associada com POX, FAL e β-1,3 glucanase que apresentaram alteraÃÃes na atividade especÃfica, o que nÃo foi observado para PFO. NÃo foi detectada formaÃÃo de H2O2 nas 48 e 96 h. Em 192 h os tratamentos EAB e EAM apresentaram desorganizaÃÃo citoplasmÃtica e colapso das cÃlulas epidÃrmicas semelhantes ao controle Ãgua. Nos tempos 48 e 96 h houve formaÃÃo de O2- nos tratamentos EAM, EAB e ASM. Em 192 h todos os tratamentos apresentaram reaÃÃo para O2- nas cÃlulas epidÃrmicas e do mesÃfilo. Estes resultados indicam o potencial dos extratos de P. sanguineus no controle da antracnose do feijoeiro, que pode ocorrer tanto por induÃÃo de resistÃncia local e sistÃmica e/ou atividade antimicrobiana diretaOne of the focus of the alternative agriculture is the disease control, wich include biological control, the induction of resistance in plants and the use of the natural products with antimicrobial activity and /or resistance induction. Basidiocarps extracts have been studied for disease control. This research focused the avaliation of the fungitoxic effect in the aqueous extracts of the mycelium (EAM), basidiocarps (EAB) and filtrate of culture (EAF) of Pycnoporus sanguineus, in the Colletotrichum lindemuthianum, and avaliate the control of anthracnose in the bean plant by theses extracts and the resistance induction through determination of activity of the enzyme peroxidase (POX), polyphenol oxidase (PFO), phenylalanine ammonia-lyase (PAL) and β-1,3 glucanase, besydes detection in situ of the reatives oxygen species (ROS) H2O2 and O2-. For the tests in vitro were utilized the extracts on concentration 1, 5, 10, 15 and 20%, avaliating the micelial growth and the germination of the C. lindemuthianum spores. In order to severity tests and determination of enzyme, extracts on concentrations 5 and 10% were applayed on the 1st trifoliate leaves of bean plant, three days before of the inoculation of the pathogen (1x104 conidia mL-1) on 1stâs and 2ndâs leaves. The same procediment was adopt for detection of ROS, instead utilized just EAM 5%, water, acibenzolar-S-methyl (150 mg i.a.L-1) and azoxystrobin fungicide (4 g. i. a. L-1). For the enzyme determination was amostrated the 1stâs and 2ndâs leaves at the moment of treatment and after 3, 6, 9, 12, 27 days. For ROS was made avaliations to 48, 96 and 192 hours after the inoculation. The results indicated direct antimicrobial activity of the extracts, having these extracts inhibited the germination, but they didnât inhibited the micelial growing. On plants, the EAF 5 e 10%, reduced 69 and 67% respectively, the severity on the 1stâs leaves, while the fungicide and ASM reduced 87 and 76% respectively. On 2ndâs leaves the more significative reductions were observed to EAB 10% and EAF 5 and 10%, with reduction of the severity of 63%. This reduction on severity can be associated with POX, PAL and β-1,3 glucanase what apresented alterations on the especific activity, what wasnât observed to PFO. The formation of H2O2 wasnât detected, on 48 and 96 hours. In 192 hours the EAB treatment apresented citoplasmatic desorganization and collapse of epidermic cell similar to the water control. In times 48 and 96 hours there was of the O2- in the EAM, EAB and ASM treatment. In 192 all of the treatments apresented reaction to O2- in epidermic cells and the mesophyll. This results apoint the potencial of P. sanguineus extracts for the control of in the anthracnose in bean plants, that can occurr by induction of the local and systemic resistance an/or antimicrobial direct activit