Influence of seminal plasma proteins on frozen ram semen quality

A expans??o de programas de insemina????o artificial (IA) em ovinos com s??men congelado tem sido limitada pela necessidade de deposi????o intrauterina do s??men e pela associa????o inconsistente entre as t??cnicas convencionais de avalia????o da qualidade do s??men e a fertilidade in vivo. Uma das alternativas para incrementar a efici??ncia de programas de IA seria o mapeamento do conte??do prot??ico do plasma seminal, em busca de marcadores para fertilidade. O objetivo do presente trabalho foi estudar o perfil prot??ico do plasma seminal de machos ovinos e avaliar a sua associa????o com a qualidade de amostras de s??men congelado. Os ejaculados dos machos ovinos foram divididos em duas al??quotas. A primeira foi utilizada para criopreserva????o, em dois diluentes: D1 (tris+gema de ovo+glicerol); e D2 (tris+gema de ovo+trealose). A segunda al??quota foi usada para a busca de prote??nas do plasma seminal atrav??s da eletroforese unidimensional. A presen??a ou aus??ncia das prote??nas foi associada com par??metros de qualidade seminal: motilidade e integridade da membrana esperm??tica, ambas pr??-congelamento e p??sdescongelamento, e integridade de acrossoma p??s-descongelamento. A motilidade esperm??tica p??s-descongelamento n??o diferiu (P > 0,05) entre D1 (18,6 ?? 2,3) e D2 (23,4 ?? 2,7). A integridade da membrana esperm??tica p??s-descongelamento foi semelhante (P > 0,05) para D1 (12,6 ?? 1,4) e D2 (15,3 ?? 1,7). Tamb??m n??o houve diferen??a (P > 0,05) entre D1 e D2 quanto ?? integridade do acrossoma p??sdescongelamento (23,0 ?? 1,5 e 21,3 ?? 1,8, respectivamente). A an??lise intra-machos identificou 17 bandas proteicas associadas com os par??metros avaliados, sendo que 10 destas associaram-se da mesma maneira, em diferentes machos. Na an??lise inter-machos, a banda com 11 kDa foi associada com menor integridade da membrana esperm??tica pr??-congelamento, a banda com 24 kDa foi associada com a redu????o na motilidade e na integridade da membrana p??s-descongelamento e a banda com 45 kDa foi associada com menor integridade da membrana pr??congelamento (P < 0,05). Portanto, essas tr??s bandas prot??icas seriam potenciais marcadores para infertilidade com s??men congelado, pois sua aus??ncia foi associada com incremento na qualidade seminal, independentemente do efeito dos machos doadores de s??men.The expansion of artificial insemination (AI) programs with frozen ram semen has been limited by the need of intrauterine semen deposition and by the inconsistency of the association between the conventional methods used to evaluate semen quality and in vivo fertility. An alternative to improve the efficiency of AI programs would be the profiling of the protein content of the seminal plasma to search for fertility markers. The objective of the present study was to study the protein profile of ram seminal plasma and to evaluate its association with parameters of frozen semen quality. Ejaculates were split in two samples. The first sample was frozen in two extenders: T1 (Tris + egg yolk + glycerol); and T2 (Tris + egg yolk + threalose). The second sample was submitted to unidimensional electrophoresis to identify proteins in the seminal plasma. The presence of the identified proteins was associated with parameters of semen quality: sperm motility and membrane integrity, both prefreezing and post-thawing, and post-thawing acrosome integrity. Post-thawing sperm motility did not differ (P > 0.05) for T1 (18.6 ?? 2.3) and T2 (23.4 ?? 2.7). Post-thawing sperm membrane integrity was similar (P > 0.05) for T1 (12.6 ?? 1.4) and T2 (15.3 ?? 1.7). There was also no difference (P > 0.05) between T1 and T2 with regard to postthawing acrosome integrity (23.0 ?? 1.5 e 21.3 ?? 1.8, respectively). An intra-ram analysis identified 17 proteins associated with the evaluated parameters: 10 of them presented similar associations for distinct rams. In the inter-ram analysis, an 11 kDa band was associated with lower pre-freezing sperm membrane integrity, a 24 kDa band was related to reduced post-thawing sperm motility and membrane integrity, and a 45 kDa band was associated with lower pre-freezing sperm membrane integrity (P < 0.05). Thus, those three protein factors would be potential markers for ram infertility with frozen semen because their absence was associated with improved semen quality, regardless of individual ram effects