Tenascin and fibronectin expression in human pulp repair after capping with calcium hydroxide and homeostasis with different agents

O controle do sangramento frente a uma exposi????o pulpar ?? de fundamental import??ncia no sucesso do capeamento direto. As solu????es de hipoclorito de s??dio e de gluconato de clorexidina t??m sido utilizadas como agentes de limpeza e hemostasia na terapia pulpar conservadora. Alguns estudos t??m indicado para o controle da hemorragia e sucesso do capeamento pulpar adesivo o hipoclorito de s??dio (COX et al, 1998; COX et al., 1999). Al??m de ser bom agente antimicrobiano, o hipoclorito possui elevado Ph, o que implicaria na solubiliza????o de fatores de crescimento da dentina, e conseq??entemente, na estimula????o ?? forma????o de dentina (SMITH et al., 2002). No entanto, pesquisas tamb??m demonstram a atividade de dissolu????o tecidual do hipoclorito quando empregado a 5.25%. Por??m esta ?? limitada ??s c??lulas superficiais pulpares sem efeitos adversos sobre o tecido pulpar subjacente (SENIA et al., 1971; ROSENFELD et al., 1978). Pouco se sabe a respeito da biocompatibilidade da clorexidina (THOMAS et al., 1995). Cox et al. (1998) sugeriram que esta subst??ncia poderia ser a causa de desastrosos resultados encontrados no estudo de Pameijer & Stanley (1998). Em contrapartida, a clorexidina a 0,2% utilizada no capeamento pulpar direto como agente hemost??tico e de limpeza, tem demonstrado boa performance em estudos em humanos (HORSTED et al., 2003) e em macacos (MURRAY et al. 2004) Diante das evid??ncias apresentadas, pode-se observar que n??o h?? unanimidade entre os pesquisadores a respeito de qual dessas subst??ncias e suas respectivas concentra????es seria mais efetiva na realiza????o das terapias conservadoras vitais, especialmente no capeamento pulpar direto. Adicionalmente, as altera????es na distribui????o de componentes da matriz extracelular (ME) t??m sido estudadas durante o desenvolvimento dent??rio e nos processos de reparo pulpar. As duas maiores glicoprote??nas da ME, Fibronectina (FNC) e Tenascina (TNC) t??m sido descritas como importantes para o est??mulo e mobilidade celulares, durante a diferencia????o de c??lulas odontoblast??ides a partir de c??lulas multipotentes da polpa. No entanto, a participa????o da ME e sua intera????o com as rea????es celulares t??m sido pouco exploradas e compreendidas. Desta forma, tornam-se fundamentais as investiga????es sobre a express??o dos componentes da 15 ME durante o processo de reparo pulpar, na tentativa de buscar melhor entendimento dos eventos de resposta deste tecido ap??s o capeamento direto. O objetivo deste estudo ?? avaliar a biocompatibilidade do hipoclorito de s??dio e do gluconato de clorexidina em diferentes concentra????es, atrav??s de estudo in vitro de cultivo celular; a genotoxicidade dessas duas solu????es, utilizando a rea????o de Feulgen para detec????o e an??lise de micron??cleos e a express??o de componentes da matriz extracelular, atrav??s de estudo imunoistoqu??mico (t??cnica da estreptoavidina-biotina) em polpas humanas expostas, tratadas com os agentes hemost??ticos hipoclorito de s??dio a 5,25% e gluconato de clorexidina a 2%, empregados previamente ao capeamento pulpar direto. Para o ensaio de citotoxicidade do MTT ser?? utilizada a linhagem celular NIH/3T3 (fibroblastos de rato). Este ensaio foi escolhido porque estudos pr??vios (COSTA, 2001; ZHANG et al., 2003) t??m mostrado ser o mesmo apropriado para a avalia????o da viabilidade ou citotoxicidade celulares, frente a materiais de uso odontol??gico. Ser??o testadas em diferentes tempos de exposi????o, as solu????es de hipoclorito de s??dio a 0,5%, 1%, 2,5% e 5,25% e de gluconato de clorexidina a 0,12%, 0,2%, 1% e 2%, bem como a solu????o salina 0,9%, que funcionar?? como controle negativo dos testes. Para o ensaio de genotoxicidade, ser?? feita a an??lise semi-quantitativa dos micron??cleos de amostras previamente emblocadas, oriundas de 45 esp??cimens com polpas humanas tratadas com hipoclorito de s??dio a 5,25% (n=16), gluconato de clorexidina (n=15) eAim Based on the great importance of the extracellular matrix (EM) in tissue development and repair, the aim of this study was to investigate the expression of their major glycoproteins, tenascin (TN) and fibronectin(FN) in the human pulp repair. Methodology Using immunohistochemistry, the expression of TN and FN was analyzed in forty-two human teeth, which were taken from a previous study. TN and FN profiles were evaluated after 7, 30, and 90 days after pulp capping with calcium hydroxide, being used three different haemostatic agents (0.9% salin solution, 5.25% sodium hypoclorite and 2% chlorhexidine digluconate) before pulp capping. Results There was no difference in the expression of TN and FN among the distinct haemostatic agents being all the time intervals taken into consideration. Both glycoproteins were found in all the pulp tissue, accomplishing the collagen fiber, and they were absent in all the mineralized tissues. Within 7 days post-treatment, it was observed a slightly more pronounced immunostaining on the exposure pulp site. Within 30 days, TN and FN demonstrated a stronger expression around the dentin barrier. TN also showed focal staining inside the reparative dentin, which was in mineralization. Within 90 days, it was observed a thin and linear expression of TN and FN delimitating the reparative dentin. In the predentin, TN showed strong immunostaining, and FN had a variable expression. Conclusions Based on the results, it may be concluded that there was no difference in the expression of TN and FN among the distinct haemostatic agents being all the time intervals taken into account. Moreover, TN and FN were present in pulp repair,confirming their active participation in this event. It might also be suggested that both glycoproteins are responsible for the odontoblastic differentiation and for the maintenance of the cell shape. It can also be concluded that TN and FN are important factors in the mineralization of the newly-formed dentin matrix