Effect of low power laser in the human pulp fibroblasts proliferation and in the activity of metalloproteinases 2 and 9 in vitro

O objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade das gelatinases (MMP-2 e MMP-9), e a prolifera????o de fibroblastos pulpares humanos in vitro, ap??s a irradia????o com um diodo laser de baixa de baixa pot??ncia (780nm). A atividade foi avaliada com zimografia e as taxas de prolifera????o e contagem celular foram obtidas atrav??s de curvas de crescimento feitas com o software SigmaPlot (8.0), ap??s a contagem em c??mara de Neubauer ao microsc??pio ??ptico. As c??lulas usadas para a zimografia foram cultivvadas em DMEM, com SFB a 10% e incubadas a 37??C em atmosfera de 5% CO2 e 95% de ar, em 100% de umidade. J??, as c??lulas usadas para a taxa de prolifera????o e contagem celular foram cultivadas em d??ficit nutricional (5% SFB). Os grupos para zimmografia e para a contagem e taxa de prolifera????o foram determinados: a) zimografia - Z1 = sem irradia????o, Z2 = 3J/cm2 e Z3 = 6J/cm2 e b) prolifera????o e contagem celular - L1 = sem irradia????o, L2 = 3J/cm2 e L3 = 6J/cm2. A contagem celular foi realizada em ap??s 2, 4 e 6 dias. Os ensaios foram realizados em triplicata. A zimografia mostrou que a ativiidade da MMP-2 foi maior que a MMP-9, e Z2 e Z3 produziram uma grande atividade, quando comparados ao rupo Z1. Os resultados da zimografia e dos testes de contagem e prolifera????o celular foram comparados por an??lise de vari??ncia (ANOVA) e complementado pelo teste Tukey. O n??vel de signific??ncia utilizado foi de % (p<0,05). A an??lise estat??stica demonstrou diferen??a entre os grupos nos diferentes dias para a prolifera????o e contagem celular. O grupo L3 obteve a maior contagem celular ao final dos seis dias avaliados. O grupo L2 demonstrou maior prolifera????o que o grupo L1. Os fibroblastos irradiados com o laser de baixa pot??ncia expressaram uma alta atividade de MMP-2 e a dose 6J/cm2 produziu uma alta taxa de prolifera????o nos primeiros diasThe aim of the present study was to evaluate the gelatinase activity (MMP-2 and 9), and proliferation of human pulp fibroblasts in vitro, after irradiation with a low level diode laser (780nm). The activity was evaluated with zymography and the proliferation rate was obtained through growth curves made in SigmaPlot (8.0), after the counting in Neubauer chamber.in light microscope. Cells used to zimography were cultived in DMEM, 10% fetal bovine serum and incubated at 37??C in atmosphere of 5% CO2 and 95% air, in 100% humidity. Cells used to proliferation rate were cultivated in nutritional deficit (5% SFB). Groups to zymography and cell proliferation were determined: zymography - Z1 = not irradiated, Z2 = 3J/cm2 e Z3 = 6J/cm2, cell proliferation: L1 = not irradiated, L2 = 3J/cm2 e L3 = 6J/cm2. The counting was made after 2, 4 and 6 days. Assays were performed in triplicate. The zymography showed that the MMP-2 activity was major with MMP-9, and, Z2 e Z3 produced a higher activity than MMP-2, when compared to Z1. Results of the zymography and proliferation test were compared by either ANOVA complemented by Tukey??s test. The level of significance was 5% (p