Development of an ELISA with recombinant antigens to detect antibodies against Mycoplasma hyopneumoniae

O Mycoplasma hyopneumoniae ?? o agente etiol??gico da Pneumonia Enzo??tica Su??na (PES), uma das principais doen??as respirat??rias que acomete su??nos no mundo. Esta doen??a ?? caracterizada por retardo no desenvolvimento, principalmente em animais em fase de crescimento e termina????o, ocasionando perdas econ??micas significativas no rebanho. O diagn??stico presuntivo ?? baseado em sinais cl??nicos e na presen??a de les??es, no entanto, testes laboratoriais s??o necess??rios para o diagn??stico conclusivo da doen??a. Embora o cultivo do agente seja considerado o padr??o ouro, o mesmo n??o ?? usado como rotina, devido ao crescimento extremamente lento deste agente e a interfer??ncia por outros micoplasmas. Desta forma, h?? a necessidade do desenvolvimento de m??todos de diagn??sticos mais sens??veis e espec??ficos para esta doen??a. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um ELISA indireto para a detec????o de anticorpos contra M. hyopneumoniae. Para isso, foram testadas individualmente seis prote??nas recombinantes de M. hyopneumoniae expressas em E. coli, consideradas esp??cie-espec??fica (P46, P95, P97 like, P102AB, Lppt e prote??na hipot??tica 987), utilizadas como ant??geno na sensibiliza????o de placas de ELISA. Cada uma destas prote??nas foi confrontada com 3 categorias de soros de su??nos. A sensibilidade e especificidade obtida para cada uma das prote??nas foram respectivamente as seguintes: P95, 74,3% e 97,6%; P46, 53,7% e 97,6%; Lppt, 28,4% e 97,2%; 987, 27,1% e 96,1%; P102AB, 65,5% e 97,6%; P97 like, 72,6% e 97,2%. Usando o ponto de corte definido, foi calculado o valor preditivo positivo que variou de 17,4% (para preval??ncias de 10%) a 99,4% (para preval??ncias de 90%), e o valor preditivo negativo que variou de 34,5% a 99,5% dependendo da preval??ncia da doen??a em uma determinada ??rea. Estes dados mostram que prote??nas como a P95, P46, P102AB e P97 like s??o potenciais alvos para uso em testes de diagn??stico para detec????o de anticorpos contra M. hyopneumoniae.Mycoplasma hyopneumoniae is the etiological agent of swine enzootic pneumonia (EP), one of the most important respiratory diseases which affect swine worldwide. This disease is characterized by retarded development, especially in animals in the growing and finishing phase, causing significant economic losses in the herd. The presumptive diagnostic is based on clinical signs and lesions, however, laboratory tests are needed for a conclusive diagnosis of disease. Although the culture of the agent is considered the gold standard, it is not used routinely because of the slow growth of the bacterium and interference by other mycoplasmas. Therefore, there is a need for development of more sensitive and specific diagnostic methods for this disease. This study aimed the standardization and validation of an ELISA for detection of antibodies against M. hyopneumoniae. For this, six recombinant proteins of M. hyopneumoniae considered species-specific (P46, P95, P97 like, P102AB, Lppt and hypothetical protein 987) were evaluated. They were used as antigen for coating ELISA plates. Each of these proteins was confronted with three sets of pig serum. The sensitivity and specificity obtained for each protein were respectively: P95, 74.3% e 97.6%; P46, 53.7% e 97.6%; Lppt, 28.4% e 97.2%; 987, 27.1% e 96.1%; P102AB, 65.5% e 97.6%; P97 like, 72.6% e 97.2%. Using the set cut-off point, we calculated the positive predictive value, which ranged from 17.4% (for prevalence of 10%) to 99.4% (for prevalence of 90%), and negative predictive value which ranged from 34.5% to 99.5% depending on the prevalence of disease in a given area. These data show that the proteins P95, P46, P97 and P102AB like are potential targets to be use in diagnostic tests to detect antibodies against M. hyopneumoniae