Evaluation of the adjuvant activity of recombinant Escherichia coli heat-labile enterotoxin B subunit fused or co-administered to rFimA of Salmonella Enteritidis.

A associa????o de ant??genos vacinais a potentes adjuvantes imunol??gicos ?? uma estrat??gia fundamental para melhorar o desempenho de vacinas de subunidade. Adjuvantes s??o subst??ncias que, usadas em combina????o com um ant??geno espec??fico, induzem mais imunidade que o ant??geno sozinho. Produtos microbianos, como a subunidade B da enterotoxina termol??bil de Escherichia coli (LTB), que ?? at??xica, t??m sido utilizados com esse prop??sito. A LTB ?? reconhecida por sua grande efici??ncia como adjuvante da imunidade de mucosa e essa capacidade depende da forma de combina????o ao ant??geno (co-administrada ou fusionada), da via de imuniza????o (mucosa ou parenteral) e da dose administrada. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade adjuvante da subunidade B recombinante da enterotoxina termol??bil de Escherichia coli, fusionada ou co-administrada, por via oral (v.o.) ou intramuscular (i.m.), utilizando a subunidade fimbrial principal recombinante da f??mbria tipo 1 (FimA) de Salmonella Enteritidis como ant??geno. Para isso, camundongos BALB/c foram imunizados v.o. e i.m. com 3 doses de rLTB, PBS (controles) ou rFimA, ou rFimA associada a adjuvante de Freund incompleto (rFimA+AI, animais imunizados via i.m.), co-administrada ou fusionada a LTB (quimera). Os n??veis de anticorpos sist??micos totais, IgG1, IgG2a e IgA anti-rFimA foram mensurados por ELISA e um ensaio de prote????o animal contra infec????o por S. Typhimurium foi realizado. Os resultados obtidos demonstraram que a rLTB apresentou atividade adjuvante estatisticamente semelhante a do adjuvante comercial somente quando co-administrada i.m. a rFimA e em rela????o a produ????o de anticorpos totais. Esses resultados confirmam que a a????o adjuvante da rLTB ?? influenciada pela forma de liga????o ao ant??geno (fusionada ou co-administrada) e pela via de administra????o. As imuniza????es n??o induziram prote????o de camundongos desafiados com S. Typhimurium, por??m o tempo de sobreviv??ncia foi maior entre os animais imunizados somente com a rFimA e rFimA+AI. Al??m disso, os n??veis de anticorpos totais, IgG1 e IgG2a obtidos pela forma quim??rica imunizada tanto v.o. quanto i.m., foram semelhantes ??queles obtidos pelos animais imunizados somente com a rFimA. Os resultados obtidos apontam para uma poss??vel atividade adjuvante da prote??na rFimA.The association of vaccine antigens to potent immunological adjuvants is a key strategy to improve the performance of subunit vaccines. Adjuvants are components that, when used in combination with a specific antigen, induce more immunity that the antigen alone. Microbial products have been used as adjuvant, including the B subunit of the thermo labile entherotoxin of Escherichia coli (LTB), which is atoxic. LTB is known by its great efficiency as mucosal immunity adjuvant and this activity depends on the shape of the antigen combination (co-administered or fused), on the immunization route (mucosal or parentheral) and the dosage. This study aims to evaluate the adjuvant activity of recombinant LTB (rLTB), both as chimeric and coadministered orally or intramuscularly, using the major fimbrial unit type 1 (FimA) of Salmonella Enteritidis as antigen. BALB/c mice were immunized orally or intramuscularly with three doses of rLTB or PBS (controls) or rFimA, rFimA associated with Freund's incomplete adjuvant (rFimA+AI, i.m. immunized animals), co-administered or fused to LTB (chimera). The levels of total systemic antibodies, IgG1, IgG2a and IgA anti-rFimA were measured by ELISA and an animal protection assay against S. Typhimurium infection was performed. The results show that rLTB only showed adjuvant activity that resembled the commercial adjuvant when coadministered intramuscularly to rFimA and for totals antibody production. These results confirm that the action of adjuvant rLTB is influenced by the shape of binding to the antigen (fused or co-administered) and route of administration. Immunizations did not induce protection of mice challenged with S. Typhimurium, but survival time was greater among animals immunized with only the rFimA and rFimA+AI. Furthermore, the total antibody titer, IgG1 and IgG2a obtained by the chimeric form, both orally as intramuscularly, were similar to those obtained by the animal only immunized with rFimA. These results suggest that rFimA has a possibility of having an adjuvant capability rFimA