Efeito da adição de antioxidantes ao gradiente contínuo de densidade de percoll e ao diluidor de congelação sobre os espermatozoides caprinos selecionados e congelados.

Objetivou-se avaliar o efeito de diferentes concentrações de antioxidantes fenólicos sobre a congelabilidade de espermatozoides caprinos, bem como a ação destes durante a centrifugação em gradientes contínuos de densidade de Percoll e após congelação do sêmen selecionado. Foram utilizados seis pools de sêmen caprino por experimento. Nos dois primeiros experimentos cada pool de sêmen foi processado e diluído em meio à base de leite desnatado (7% glicerol), acrescido ou não de antioxidantes, de acordo com o experimento e o grupo experimental [Experimento 1: 0, 15, 25, 50, 75 ou 100 &#956;M de catequina ou de epigalocatequina galato (EGCG); Experimento 2: 0, 15, 25, 50, 75 ou 100 &#956;M de resveratrol ou de quercetina]. No terceiro experimento, cada pool de sêmen foi centrifugado em gradiente contínuo de densidade de Percoll e congelado, de acordo com o grupo experimental (NS=não selecionado; S=selecionado; SC75=selecionado com 75 &#956;M de catequina; SE100=selecionado com 100 &#956;M de EGCG; SQ25=selecionado com 25 &#956;M de quercetina; SR25=selecionado com 25 &#956;M de resveratrol; SR75=selecionado com 75 &#956;M de resveratrol). No Experimento 1, imediatamente após a descongelação, as velocidades linear progressiva (VSL) e média da trajetória (VAP) foram superiores (P<0,05) no grupo tratado com 15 &#956;M de catequina do que com 50 e 100 &#956;M; a oscilação (WOB) foi maior (P<0,05) com 0, 15 e 25 &#956;M de catequina do que com 100 &#956;M; e o batimento flagelar cruzado (BCF) foi maior (P<0,05) com 75 e 100 &#956;M de catequina do que com 0 &#956;M. A motilidade progressiva (MP) foi maior (P<0,05) com 0 e 15 &#956;M de EGCG do que com 50 e 75 &#956;M e a linearidade (LIN) foi maior (P<0,05) com 0 &#956;M de EGCG do que com 100 &#956;M. No Experimento 2, a WOB foi maior (P<0,05) com 0 e 25 &#956;M de resveratrol ou 0 &#956;M de quercetina do que com 100 &#956;M, imediatamente após a descongelação. Para o Experimento 3, a MP, LIN, retilinearidade (STR) e WOB dos grupos selecionados em gradientes de Percoll foram maiores (P<0,05) do que as do NS; nos grupos SC75, SR25 e SR75 a VSL foi maior (P<0,05) do que no NS; a amplitude de deslocamento lateral de cabeça (ALH) foi maior (P<0,05) no grupo NS do que nos demais e o SQ25 reduziu (P<0,05) o potencial de membrana mitocondrial, em relação aos demais grupos. Após descongelação do sêmen, a MP, LIN, WOB, VSL e VAP foram maiores (P<0,05) nos grupos selecionados do que no NS, com exceção do SE100 e SQ25; o SC75 teve maior (P<0,05) STR do que o NS; a ALH foi menor (P<0,05) nos grupos S, SC75, SR25 e SR75 do que no NS; e o BCF foi menor no S do que no NS. A integridade de membrana plasmática foi maior (P<0,5) nos grupos selecionados do que no NS, com exceção do SE100; a porcentagem de células intactas e de não mortas foi maior (P<0,05) nos grupos selecionados do que no NS. Conclui-se que altas concentrações (50 a 100 &#956;M) de catequina e EGCG inibem a cinética de espermatozoides congelados de caprinos, em caráter transitório, e que o resveratrol e a quercetina não têm qualquer influência sobre a congelabilidade do sêmen caprino. Por outro lado, a seleção de espermatozoides em gradientes contínuos de densidade de Percoll é uma metodologia viável para a espécie caprina e compatível com o processo de congelação; independente da terapian antioxidante usada.It was aim to evaluate the effect of different concentrations of phenolic antioxidants on freezability of goats sperm, as well as their action during centrifugation in continuous Percoll density gradients and after selected semen freezing. Six goat semen pools were used for each of the three experiments. In the first two experiments, each semen pool was processed and diluted in the skimmed milk based extender (7 % glycerol), with or without antioxidants, according to experiment and experimental group [1 Experiment: 0, 15, 25, 50, 75 or 100 &#956;M catechin or epigallocatechin gallate (EGCG); Experiment 2: 0, 15, 25, 50, 75 or 100 &#956;M resveratrol or quercetin]. In Experiment 3, each semen pool was centrifugated in continuous Percoll density gradients and frozen (with or without antioxidants) according to experimental groups (NS=non selected; S= selected; SC75= selected with 75 &#956;M catechin; SE100= selected with 100 &#956;M EGCG; SQ25=selected with 25 &#956;M quercetin; SR25=selected with 25 &#956;M resveratrol; SR75=selected with 75 &#956;M resveratrol). In Experiment 1, immediately after thawing, the straight linear velocity (VSL) and average path velocity (VAP) were greater (P<0.05) in 15 &#956;M catechin than in 50 and 100 &#956;M; wobble (WOB) was higher (P<0.05) in catechin 0, 15 and 25 &#956;M than in 100 &#956;M; beat cross frequency (BCF) was higher (P<0.05) in 75 and 100 &#956;M catechin than in 0 &#956;M. Progressive motility (PM) was greater (P<0.05) with 0 and 15 &#956;M EGCG than with 50 and 75 &#956;M; and linearity (LIN) was higher with 0 &#956;M EGCG than with 100 &#956;M. In Experiment 2 WOB was higher (P<0.05) in 0 and 25 &#956;M resveratrol or 0 &#956;M quercetin than 100 &#956;M, immediately after thawing. In Experiment 3, immediately after sexing, PM, LIN, straightness (STR) and WOB from sexed groups were higher (P<0.05) than those from NS; SC75, VSL was higher (P<0.05) in SR25 and SR75 than in NS; amplitude of lateral movement of the head (ALH) was higher (P<0.05) in the NS than in other groups. SQ25 reduced (P<0.05) the mitochondrial membrane potential, compared to other groups. After thawing, PM, LIN, WOB, VSL and VAP were higher (P<0.05) in sexed groups than in NS, except to SE100 and SQ25; SC75 had greater (P<0.05) STR than NS; ALH was lower (P<0.05) in S, SC75, SR25 and SR75 than in NS; BCF was lower (P<0.05) in S than in NS; plasma membrane integrity was higher (P<0.05) in sexed groups than in NS, except to SE100; the percentage of intact and not dead cells was greater (P