Detecção molecular de Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi em mamíferos selvagens de vida livre.

Os Tripanossomatídeos são protozoários hemoflagelados responsáveis por diversas enfermidades zoonóticas, entre elas as Leishmanioses Visceral e Tegumentar e também a Tripanossomíase Americana, que afetam humanos e mamíferos domésticos e selvagens. Os animais selvagens constituem uma importante fonte de infecção para a população humana, uma vez que milhões de pessoas vivem em áreas de risco e muitas vezes entram em contato com o ciclo silvestre destas enfermidades, contraindo-as principalmente por meio de seus vetores. Diante disso, o objetivo desta pesquisa foi realizar a detecção molecular de Trypanosoma cruzi e Leishmania spp. em mamíferos selvagens de vida livre. No período de Outubro de 2012 a Setembro de 2013 foram realizadas quatro expedições a municípios do estado de Pernambuco Brasil, sendo capturados 38 animais selvagens de vida livre dos municípios de Petrolina e Igarassu. Para a detecção de kDNA de T. cruzi foram adicionadas amostras de 13 Didelphis albiventris provenientes dos municípios de Paulista e São Lourenço da Mata, obtidas de banco de amostras, totalizando 51 animais, sendo Didelphis albiventris (34/51), Marmosa murine (1/51), Trichomys sp. (9/51) and Galea spixii spixii (7/51). Para captura dos animais foram utilizadas armadilhas do tipo Tomahawk (captura viva), iscados com uma mistura de frutas e pasta de amendoim. Os animais capturados foram contidos inicialmente por métodos físicos, seguidos de métodos químicos, para coleta de amostras de sangue, pele e medula óssea. Após o procedimento os animais foram mantidos nas gaiolas, sendo monitorados e devolvidos ao local de origem após a recuperação anestésica. As amostras biológicas foram remetidas ao Laboratório de Doenças Parasitárias dos Animais Domésticos, da Universidade Federal Rural de Pernambuco, onde foram submetidas à extração de DNA e, em seguida, foram analisadas por meio da Reação em Cadeia da Polimerase. Para detecção de fragmentos de kDNA de Leishmania spp. foram utilizados iniciadores específicos para os complexos Leishmania donovani (MC1/MC2) e Leishmania (Viannia) braziliensis (B1/B2) e para detecção de kDNA específico de cepas de T. cruzi foram utilizados os iniciadores S35 e S36. Após a realização do diagnóstico molecular, verificou-se que as 38 amostras analisadas para detecção de Leishmania spp., obtiveram resultado negativo. Por outro lado, foram detectados fragmentos de kDNA de T. cruzi com 330pb em 15,7% (8/51) das amostras provenientes de animais da espécie D. albiventris de Petrolina-PE. Pode-se concluir que, em Petrolina-PE, a espécie D. albiventris pode participar da cadeia epidemiológica no ciclo silvestre de Trypanosoma cruzi.The Trypanosomatids are hemoflagellate protozoa responsible for many zoonotic diseases, including visceral and cutaneous leishmaniasis and American trypanosomiasis also affecting humans and domestic and wild mammals. Wild animals are important source of infection for the human population, since millions of people live in areas at risk and often come into contact with the sylvatic cycle of these diseases, contracting them primarily through their vectors. Thus, the objective of this research was to perform molecular detection of Trypanosoma cruzi and Leishmania spp. in wild free-living mammals. In the period October 2012 to September 2013 four expeditions were held in municipalities of the state of Pernambuco - Brazil, being capturend 38 free-living wild animals in the municipalities of Petrolina and Igarassu. For the detection of T. cruzi kDNA samples of 13 Didelphis albiventris from the districts of Paulista and São Lourenço da Mata were added, obtained of a stock of biological material, totaling 51 animals, with Didelphis albiventris (34/51), Marmosa murine (1/51) Trichomys sp. (9/51) and Galea spixii spixii (7/51). To capture animal Tomahawk traps (live trap) were used, baited with a mixture of fruit and peanut butter. Captured animals were initially contained by physical methods, followed by chemical methods for collecting samples of blood, skin and bone marrow. After the procedure the animals were kept in cages, being monitored and returned to the place of origin after anesthetic recovery. Biological samples were sent to the Laboratory of Parasitic Diseases of Domestic Animals, at Federal Rural University of Pernambuco, where they were subjected to DNA extraction and then analyzed by Polymerase Chain Reaction. For detection of fragments of kDNA of Leishmania spp. specific primers were used for the Leishmania donovani complex (MC1/MC2) and L. (Viannia) braziliensis (B1/B2), and for detecting specific strains from kDNA of the T. cruzi S35 and S36 primers were used. After performing molecular diagnostics, it was found that 38 samples for detection of Leishmania spp. were negative. Moreover, fragments of T. cruzi kDNA 330bp in 15.7% (8/51) of samples from animals of the species D. albiventris from Petrolina - PE were detected. This result suggests the involvement of the species D. albiventris from Petrolina - PE in the epidemiological chain of sylvatic cycle of Trypanosoma cruzi