Contagious ecthyma virus isolation and identification by polymerase chain reaction.

O Ectima contagioso (EC) é uma virose aguda que acomete caprinos e ovinos, amplamente disseminada em todo mundo, inclusive no Brasil, especialmente na Região Nordeste, onde a caprinovinocultura é amplamente praticada para produção de pele, carne e leite. No estado de Pernambuco, tem sido relatada como uma das principais enfermidades infecciosas de caprinos e ovinos do semi-árido. Apesar do caráter endêmico da enfermidade e da sua importância, poucos trabalhos de pesquisa têm sido realizados no país com relação ao vírus EC, que possam subsidiar o controle da enfermidade, fundamentado, principalmente, na vacinação dos animais. O EC é uma doença que pode ser confundida com as enfermidades vesiculares, como a Febre Aftosa, havendo assim a necessidade de sua diferenciação, sobretudo como suporte às ações do Programa Nacional de Erradicação da Febre Aftosa (PNEFA) do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA). Para tal, é necessário dispor de um teste rápido e eficiente para diagnóstico. Objetivou-se desse modo, isolar o vírus EC de amostras clínicas, bem como confirmar o diagnóstico etiológico da doença através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Amostras de crostas coletadas de sete animais originários do estado de Pernambuco, que apresentavam sinais clínicos sugestivos de EC, foram inoculadas em células epiteliais de córnea fetal caprina (FCC 40) e avaliadas a cada 24 horas para observação de efeito citopático (ECP). As camadas com sobrenadante foram congeladas e processadas para a extração de DNA viral a ser empregado na PCR, empregando-se os oligonucleotídeos iniciadores para amplificação do gene B2L da cepa NZ2. As amostra estudadas do vírus EC apresentaram intensidade variada (de 10 a 40%) do ECP em culturas de células de córnea, com a maioria apresentando ECP em apenas cerca de 10%. O ECP foi caracterizado por células que se tornaram desiguais na aparência, arredondadas, formação de sincícios e vacúolos, retração das membranas celulares de células vizinhas e desprendimento de células. A especificidade do ECP foi confirmada pela PCR, com a amplificação de um fragmentos de DNA com 235 pb, que corresponde ao tamanho esperado. Conclui-se que o isolamento do vírus EC em cultivo de células FCC 40 e sua identificação através da PCR, é um método aplicável ao diagnóstico de EC potencialmente útil no diagnóstico diferencial das doenças vesiculares do PNEFA.Contagious ecthyma (CE) is an acute viral disease that affects sheep and goats, widespread throughout the world, including Brazil, especially in the Northeast, where sheep and goat rearing is practiced for the production of skin, meat and milk. In the state of Pernambuco, has been reported as one of the major infectious diseases of goats and sheep in semi-arid. Despite the endemicity of the disease and its importance, few research studies have been conducted in the country with the virus CE, that can support the control of the disease, grounded mainly on vaccination of animals. CE is a disease that can be confused with the vesicular such as Footh and Mouth Disease, with the need for differentiation, especially to support the actions of the National Program for the Eradication of Footh and Mouth Disease (PNEFA) of the Ministry of Agriculture and Livestock (MAPA). For this it is necessary to have a fast and efficient test for diagnosis. Thus aimed to isolate the virus from clinical specimens CE, as well as confirm the etiology of the disease by Polymerase Chain Reaction (PCR). Crust samples collected from seven animals originating in the state of Pernambuco, with clinical signs suggestive of CE, were inoculated in corneal epithelial cells fetal goats (FCC 40) and evaluated every 24 hours for observation of cytopathic effect (CPE). The supernatant layers were frozen and processed for the extraction of viral DNA to be used in PCR, using the primers for B2L gen amplification. The sample studied CE virus had varying degrees (10 to 40%) of CPE in cultures of corneal cells, with most featuring CPE in only about 10%. The CPE was characterized by cells that have become uneven in appearance, rounded appearance of syncytia and vacuoles, shrinkage of cell membranes of neighboring cells and detachment of cells. The specificity of CPE was confirmed by PCR, with amplification of DNA fragments with 235 bp, which corresponds to the expected size. It is concluded that the EC virus isolation in cell cultures FCC 40 and its identification by PCR is a method applicable to the diagnosis of CE potentially useful in the differential diagnosis of vesicular diseases of PNEFA