Desenvolvimento de sistema de análise por injeção seqüencial para determinação espectrofotométrica da capacidade antioxidante em bebidas empregando o radical derivado do N-fenil-1, 4-fenilenodiamino

Neste trabalho foi proposto um sistema de análises por injeção sequencial (SIA) para determinação espectrofotométrica da capacidade antioxidante em amostras de bebidas, a partir da geração “in situ” do radical derivado do reagente N-fenil-1,4-fenilenodiamino (NFFD•+). O radical NFFD•+ foi produzido em linha pela oxidação do NFFD empregando o Fe3+ como oxidante. Na otimização do sistema SIA foram avaliados os seguintes parâmetros: ordem de aspiração dos reagentes e amostra, estabilidade da solução de NFFD, pH da amostra, proporção NFFD/Fe3+, volumes das soluções dos reagentes e amostra e tempo de interrupção do fluxo. O ácido gálico foi empregado como padrão de calibração para os ensaios. Após as etapas de otimização univariada do método proposto obteve-se faixa linear de 10 a 40 mg L-1, com limites de detecção (3σ) de 1,0 mg L-1 e quantificação (10σ) de 3,3 mg L-1, respectivamente. Para avaliar o método proposto, foram realizados testes de reatividade do radical NFFD•+ frente a compostos fenólicos, tiólicos e de outra natureza. A redução do sinal analítico frente a inibição do radical derivado do NFFD foi mais pronunciada para ácido ascórbico, ácido tânico e cisteína, nesta ordem. A capacidade antioxidante com o radical derivado do NFFD foi avaliada em amostras de vinhos e chás, e os resultados foram concordantes com os métodos de referência (Folin-Denis, ABTS e DPPH), de acordo com o coeficiente de correlação, além do ensaio com radical DMPD•+, baseado no teste t. Assim a amina NFFD por ser utilizada para avaliação da atividade antioxidante em amostras de bebidas. Adicionalmente, as amostras de vinhos foram submetidas a testes de estabilidade temporal e avaliação do efeito do processo de ozonização em relação à variação da capacidade antioxidanteIn this work was proposed a sequential injection system for spectrophotometric determination of antioxidant capacity in beverage samples with “in situ” radical generation from N-phenyl-1,4-phenylenediamine (NFFD•+). The radical NFFD•+ was produced by on line oxidation of NFFD employing Fe3+ as oxidant. The optimization of SIA system evaluated: aspiration order of reagents and sample, stability of the NFFD solution, sample pH, NFFD/Fe3+ proportion, reagents and sample volumes and stopped flow time. The gallic acid was used as standard of antioxidant compound for proposed sequential injection method. After chemical and physical univarieted optimization the linear range obtained in gallic acid concentration was from 10 to 40 mg L-1, with detection (3σ) and quantification (10σ) limits of 1.0 and 3.3 mg L-1, respectively. To evaluate selective of radical, studies of reactivity were performed with NFFD•+ and phenolic and thiol molecules and others compounds. The reducing capacity of NFFD•+ radical was observed preferentially for ascorbic acid, tannic acid and cysteine in this order. The antioxidant capacity with NFFD•+ radical was measured in samples of wines, infusions and teas. The results were agreement with the references methods (Folin-Denis, ABTS and DPPH), in accord with correlation coefficient, and additionally with the radical DMPD•+, based on t test. This way, the SIA spectrophotometric method exploring the radical NFFD•+ can be employed for the antioxidant capacity measured. Additionally, temporal stability and the ozonization effect in wine samples were evaluated using antioxidant capacity as parameter