Herstellung und Charakterisierung von chimärisierten Varianten der monoklonalen Antikörper EBU-65 und EBU-141 für die therapeutische Anwendung bei reifen B-Zell-Neoplasien

Trotz der seit 2015 zugelassenen therapeutischen monoklonalen Antikörper Daratumumab und Elotuzumab zur Behandlung des Multiplen Myeloms und dem bereits fest etablierten Rituximab in der Therapie von B-Zell-Lymphomen profitieren nicht alle Patienten von diesen Therapieoptionen. Insbesondere das Multiple Myelom hat nach wie vor eine schlechte Prognose. Neue Oberflächenmoleküle für zielgerichtete Immuntherapien könnten die Behand-lung und das Überleben der Patienten in Zukunft weiter verbessern. CD75s (ursprüngliche Bezeichnung CDw75) ist ein Neuraminidase-sensitives sialyliertes Lactosamin auf der Zelloberfläche von reifen B-Zell-Neoplasien, wie dem Multiplen Myelom oder dem Burkitt-Lymphom, und könnte als Antigen im Rahmen einer Antikörpertherapie Potential für die Behandlung dieser Erkrankungen haben. Die murinen IgM-Antikörper EBU 141 und EBU-65 binden selektiv an CD75s (EBU-141) sowie an ein verwandtes Antigen, welches, angelehnt an die ursprüngliche Nomenklatur von CD75s, als „CDw75-like“ (EBU-65) bezeichnet wurde und bisher nicht näher charakterisiert ist. Beide Antikörper zeigen nur wenig Reaktivität gegenüber gesundem Gewebe. Ziel dieser Arbeit war die Charakterisierung der Bindungs¬eigenschaften und Effektor-mechanismen dieser Antikörper in vitro, um anhand der Ergebnisse einen abgeleiteten chimären Antikörper herzustellen, dessen therapeutisches Potential für die Behandlung reifer B-Zell-Neoplasien beim Menschen evaluiert werden sollte. Wie bereits von Gramatzki et al. 1991 beschrieben, konnte in dieser Arbeit ebenfalls gezeigt werden, dass die Hybridomantikörper EBU-65 und EBU-141 auf verschiedenen Myelom- und Burkitt-Lymphom-Zelllinien, sowie auf primären Patientenzellen binden. Bei der Charak-terisierung der Wirkmechanismen dieser Antikörper, die im Rahmen dieser Arbeit erstmalig durchgeführt wurde, zeigt sich insbesondere eine potente Komplement-abhängige Zytotoxizität (CDC) gegenüber den getesteten Tumorzelllinien. Darüber hinaus kann EBU-141 den Zelltod von B-Zell-Lymphom-Zellen nach sekundärer Kreuzvernetzung des Anti-körpers auf der Zell¬oberfläche induzieren. Aufgrund seiner funktionellen Eigenschaften wurde der gegen CD75s gerichtete Antikörper EBU-141 für die Her¬stellung eines chimären Antikörpers ausgewählt. Die variablen Regionen von EBU-141 wurden isoliert und der chimäre IgG1ĸ-Antikörper chEBU-141 im Zuge dieser Arbeit generiert und produziert. chEBU-141 zeigt die erwartete Reaktivität gegenüber CD75s auf Myelom- und Burkitt-Lymphom-Linien, wobei die Bindungsstärke im Gegensatz zum parentalen IgM-Antikörper EBU-141 – wie zu erwarten war – geringer ist. Die Komplement-abhängige Zytotoxizität von EBU-141 gegenüber den untersuchten Zelllinien konnte für den chimären IgG1-Antikörper chEBU 141 nicht mehr nachgewiesen werden. Allerdings vermittelt dieser neue Antikörper eine potente Antikörper-abhängige Zytotoxizität gegenüber reifen B-Zell-Neoplasien durch die effektive Rekrutierung von humanen PBMC oder NK-Zellen als Effektorzellen. CD75s ist durch sein Expressionsmuster ein interessantes Antigen für die Immuntherapie von reifen B-Zell-Neoplasien. Im Rahmen dieser Arbeit konnte gezeigt werden, dass sowohl die Bindungseigenschaften als auch die potente Antikörper-abhängige zellvermittelte Zyto-toxizität (ADCC) des neuen, chimären, gegen CD75s gerichteten IgG1-Antikörpers chEBU-141 vielversprechende Eigen¬schaften für einen immuntherapeutischen Ansatz beim Multiplen Myelom oder Burkitt-Lymphom darstellen und die weitere Evaluation von chEBU-141 sinnvoll erscheint. Mittels verschiedener Verfahren, wie beispielsweise einer Affinitätsreifung oder dem Fc-Engineering, könnten die Affinität und die Effektorfunktionen von chEBU 141 optimiert werden, um das zytotoxische Potential des Antikörpers hinsichtlich einer therapeutischen Anwendung noch weiter ausschöpfen zu können