Durée de vie et polarisation de fluorescence du conjugué sérumalbumine de boeuf-dimétylaminonaphtalène sulfonate

On examine les différents facteurs qui déterminent les courbes de dépolarisation de la fluorescence émise par les protéines conjuguées et leur influence sur la mesure de la moyenne harmonique ph, des temps de relaxation. On aborde ensuite l’étude expérimentale d’une série de préparations de sérum-albumine de bœuf conjuguée avec le DNS dont le nombre moyen N de fluorophores par molécule s’étend de 0,6 à 11.La forme de la décroissance, mesurée à l’aide de la méthode du photoélectron unique dépend de N. Si N est inférieur à 1, on obtient une décroissance exponentielle dont la constante de temps est voisine de 20 ns. Pour des valeurs de N supérieures à 1, la décroissance est complexe et peut être décrite au moyen de la somme de deux exponentielles. La proportion de l'exponentielle de constante courte augmente avec N.En comparant les courbes de dépolarisation obtenues par variation de température et par addition de saccharose, on montre que l’activation thermique des rotations est négligeable de 0 à 40 °C. L’application de la formule de WEBER aux courbes de dépolarisation thermique donne les résultats suivants :A pH isoionique, la valeur de Ph ne dépend pas de N, elle est en bon accord avec les dimensions de la molécule telles qu’elles sont déterminées par d’autres techniques physiques.A pH 2 le temps de relaxation dépend de N. Ce résultat s’explique par l’existence d’un polydispersité de temps de relaxations dont certains sont relativement petits. Dans ces conditions, la formule de WEBER n’est plus valable et fournit un temps de relaxation harmonique apparent d’autant plus grand que la constante de décroissance est élevée.Enfin, le saccharose semble induire des changements dans la molécule de B.S.A.-DNS, ce qui le rend impropre à la détermination des temps de relaxation de cette substance