HPLC versus UPLC : avaliação de aspetos críticos à transferência e validação de métodos analíticos

Dissertação de mestrado em Biotecnologia Farmacêutica, apresentada à Faculdade de Farmácia da Universidade de CoimbraA cromatografia tornou-se no primeiro método de separação de espécies quimicamente muito semelhantes. Neste contexto, a aplicação da cromatografia líquida (HPLC) na indústria farmacêutica tem vindo a destacar-se pelas suas inúmeras vantagens. Não obstante, a rotina de um laboratório de controlo de qualidade requer análises complexas num curto intervalo de tempo. Desta forma, a transferência de método de quantificação de um produto de HPLC para UPLC tem vindo a destacar-se por esta técnica, UPLC, ser relativamente mais rápida e abranger um maior número de lotes para análise. Com o intuito de uma maior rentabilidade laboratorial, é necessário que os métodos sejam, então, transferidos em HPLC para UPLC. Posteriormente à transferência analítica, é necessário proceder a uma etapa de validação do método em questão. A validação do método analítico garante, através de estudos experimentais, que o mesmo tem a capacidade de desempenho consistente com a aplicação que requer. Desta forma, a validação de um método analítico é fundamental para implementar um sistema de controlo de qualidade em qualquer laboratório analítico. A validação de um método incluiu o estudo de diversos parâmetros definidos pela ICH e pela EP, nomeadamente a seletividade, linearidade, exatidão, precisão, ensaio de adequabilidade do sistema, robustez e estabilidade da amostra e do padrão. Deste modo, o presente trabalho teve como propósito a transferência de um método analítico de quantificação da Cefuroxima em HPLC para UPLC. Foram estudados quais os parâmetros que poderiam ser alterados para obter resoluções entre impurezas conforme os limites especificados. Após a obtenção das condições cromatográficas ideais em UPLC, procedeu-se à validação do método. Foram executados dois métodos analíticos em UPLC: um correspondente ao método de doseamento do princípio ativo e outro correspondente ao método de quantificação de compostos relacionados. Inicialmente avaliou-se se o equipamento utilizado estaria apto a gerar resultados com exatidão e precisão. Uma vez testado, confirmou-se que o sistema era capaz de fornecer dados de qualidade aceitáveis. VIII Os dois métodos demonstraram ser seletivos e específicos para a determinação da Cefuroxima e todos os seus compostos relacionados. Foi ainda demonstrado que, os dois métodos são capazes de gerar resultados linearmente proporcionais à concentração da substância presente na amostra com precisão e exatidão. Os limites de deteção e quantificação, no método de compostos relacionados, são adequados tendo em consideração o âmbito de utilização do mesmo. Assim, o método analítico apresentado demonstrou ser suficientemente sensível para a deteção e quantificação da Cefuroxima e de todas as impurezas a ela associadas. De realçar, também, que após a análise da estabilidade da amostra e do padrão, esta era garantida durante 24 horas e que, apesar de alterações que possam suceder nos parâmetros do método analítico de doseamento do princípio ativo, este é considerado como robusto.Chromatography became the first separation method of chemically similar species. In this context, high pressure liquid chromatography´s application in pharmaceutical industry has come to stand out for its numerous advantages. Nevertheless, the standard procedure of quality control laboratory requires complex analysis in a short period of time. Thus, the transference of HPLC quantification method for UPLC has to stand out since it’s relatively faster and reach a large number of lots for analysis. In order to have great profitability in laboratory, it’s worthwhile that methods are transferred from HPLC to UPLC. However, after analytical transference, a validation step is necessary. Method’s validation ensures that, through experimental studies, it’s capable of being performed with the application that is desired to. Thus, the validation of an analytical method is essential to implement a system of quality control in any analytical laboratory. A method validation included studies of various parameters defined by ICH and EP, namely selectivity, linearity, accuracy, precision, system suitability test, robustness and sample and standard’s stability. Therefore, this study was intended to a transference of an analytical method for Cefuroxime’s quantification from HPLC to UPLC. Parameters that could be changed in order to have impurities’ resolution in an acceptable criteria were studied. After obtaining optimal chromatographic conditions for UPLC, validation was proceeded. Two UPLC analytical methods were performed, a corresponding method of assaying the active and the other corresponding to the related compounds’ quantification method. Initially it was evaluated if the equipment in use would be able to generate results with accuracy and precision. Once tested, it was confirmed that the system was capable of providing acceptable data quality. Two methods proved to be specific and selective for the determination of Cefuroxime and all its related compounds. It has been shown that both methods are capable of generating results linearly proportional to the substance’s concentration in the sample, with precision and accuracy. X Detection and quantification limits of related compounds’ method are suitable, considering the intended use for it. Thus, the analytical method presented has proved to be sufficiently sensitive for Cefuroxime’s detection and quantification and all its related compounds. Noteworthy, after an analysis of standard and sample’s stability, it was assured for 24hours and, despite changes that may occur in analytical method parameters, this is considered robus