Diagnóstico y prevención de la neosporosis bovina. Desarrollo de técnicas serológicas y evaluación de inmunógenos basados en proteínas recombinantes

Tesis para optar al título de Doctora en Ciencias Veterinarias, de la Universidad Nacional del Litoral, en 2019La neosporosis es una enfermedad abortígena, causada por el parásito protozoario Neospora caninum. No hay tratamientos o vacunas disponibles, el control se basa en el diagnóstico y las estrategias de manejo. Se desarrollaron proteínas recombinantes de N. caninum para utilizarlas en una prueba diagnóstica y evaluarlas como inmunógenos en la elaboración de una vacuna. Se desarrolló un ELISA de competición (ELISAcSAG1t) basado en la proteína SAG1 truncada. La prueba se validó para sueros de bovinos y de pequeños rumiantes, utilizando 1123 muestras de bovinos y 1876 muestras de ovinos y caprinos. La vacuna se formuló con las proteínas MIC1, MIC3, SRS2 y GRA7, y como adyuvante liposomas suplementados con oligodeoxinucleotidos-CpG. Se realizaron dos inmunizaciones en novillos y un desafío con 100000000 de taquizoitos de la cepa NC-1 (días 0, 21 y 56). El punto de corte del ELISAcSAG1t en bovinos fue ≥28%I, con una Se-D de 98,4% y una Es-D de 98,5% y en pequeños rumiantes ≥34%I, con una Se-D de 97,1% y una Es-D de 97,4%. Las proteínas MIC1, MIC3 y SRS2 estimularon un aumento de IgG total, IgG1 e IgG2. La proteína GRA7 no fue inmunogénica. Los experimentos de evaluación de la inmunidad celular y la protección frente al desafío no fueron concluyentes. El ELISAcSAG1t es útil para el diagnóstico de neosporosis en bovinos y pequeños rumiantes, dada su apropiada Se-D y Es-D. La capacidad de la vacuna de generar respuesta inmune celular y protección frente al desafío se deberá seguir evaluando a partir de los resultados obtenidos.Neosporosis is an abortigenic disease, caused by the protozoan parasite Neospora caninum. Disease control is based on diagnosis and management strategies, due to the lack of treatments and vaccines. Recombinant N. caninum proteins were developed to be used in a diagnostic test and to be evaluated as immunogens in the development of a vaccine. A competitive ELISA (cELISAtSAG1) based on the truncated SAG1 protein was developed. The test was validated with sera from cattle and small ruminants, using 1123 cattle samples and 1876 sheep and goat samples. The vaccine was formulated with MIC1, MIC3, SRS2 and GRA7 recombinant proteins, adjuvanted with liposomes and oligodeoxynucleotides-CpG. Two immunizations and a challenge with 100 million tachyzoites of strain NC-1 were performed in steers (days 0, 21 and 56). The cut-off point of cELISAtSAG1 was ≥28%I, with a D-Se of 98,4% and a D-Sp of 98,5% in cattle and ≥34%I, with a D-Se of 97.1% and an D-Sp of 97.4% in small ruminants. MIC1, MIC3 and SRS2 proteins stimulated IgG, IgG1 and IgG2 produccion in cattle. GRA7 protein was not immunogenic. The evaluation of cellular immunity and protection against challenge experiments were inconclusive. cELISAtSAG1 is useful for the diagnosis of neosporosis in bovines and small ruminants, given the appropriate D-Se and D-Sp values obtained. The ability of the vaccine to generate cellular immune response and protection against the challenge should continue under evaluation based on the obtained results.EEA RafaelaFil: Novoa, María Belen. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina