Dried Spots associated to an LC-DAD method for the simultaneous determination of MDMA (ecstasy) and MDA in oral fluid samples

O ecstasy é uma droga sintética cujo compostos 3,4-metilenodioximetanfetamina (MDMA) e 3,4-metilenodioxianfetamina (MDA, metabólito) são seus principais constituintes. Por tornarem o usuário mais sociável, são populares entre os jovens mesmo sendo um sério problema de saúde devido aos seus efeitos como alteração sensorial, arritmias e hipertermia. Neste sentido, a análise forense de drogas se faz uma importante ferramenta para inibir seu consumo e distribuição e, portanto, um método para determinação simultânea do MDMA e MDA, utilizando a técnica de amostragem dried oral fluid spot (DOFS) combinada com sistema LC-DAD, foi desenvolvido com foco em sua aplicabilidade na toxicologia forense. As amostras DOFS, preparadas a partir de 150 µL de fluido oral, lidocaína (padrão interno) e papel aquarela (gramatura 300 g/m²), foram extraídas com metanol e pré-concentradas em ácido trifluoroacético (TFA) 0,05% v/v. A separação cromatográfica foi realizada utilizando coluna fenil e fase móvel composta por acetonitrila:10 mmol/L-1 TFA, em modo isocrático. A detecção e identificação foi obtida com detector de arranjo de diodos monitorando os comprimentos de onda entre 195 e 300 nm. O método estabelecido foi validado com diversos ensaios experimentais em termos de seletividade, efeito matriz (82,4 - 106 %), recuperação (84,2 - 98,2 %), efeito residual, precisão intra e interdia (1,37 - 9,85 e 5,78 - 15,3 %, respectivamente), exatidão (0,23 - 4,91 %), integridade de diluição e robustez (de -19,1 a 7,31 %). Estudos de estabilidade de curta (temperatura ambiente, 3 dias) e longa duração (- 6ºC, 30 dias), de pós processamento (20 ºC, 2 dias) e após ciclos de congelamento e descongelamento (3 ciclos de 12h) também foram realizados, e os resultados indicaram total integridade das amostras. Com uma faixa linear entre 0,012 e 5,00 µg/mL-1 e limites de detecção e de quantificação de 0,006 e 0,012 µg/mL-1, respectivamente, o procedimento por DOFS se mostrou com alto potencial para determinação de MDMA e MDA em fluido oral, mesmo em sistemas de menor sensibilidade como a LC-DAD, representando uma alternativa relativamente simples e de baixo custo para as convencionais técnicas instrumentais e de amostragem dentro do campo forense.Ecstasy is a synthetic drug whose compounds 3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA) and 3,4-methylenedioxyamphetamine (MDA, metabolite) are its main constituents. As they make the user more sociable, they are popular with young people, even though it is a serious health problem due to its effects such as sensory changes, arrhythmias, and hyperthermia. In this sense, forensic drug analysis becomes an important tool to inhibit its consumption and distribution. Therefore, a method for simultaneous determination of the MDMA and MDA, using the dried oral fluid spot (DOFS) sampling technique combined with the LC-DAD system, was developed with a focus on its applicability within of forensic toxicology. The DOFS samples, prepared from 150 µL oral fluid, lidocaine (internal standard), and watercolor paper (weight 300 g/m²), were extracted with methanol and pre-concentrated in trifluoroacetic acid (TFA) 0.05% v/v. Chromatographic separation was performed using phenyl column and mobile-phase constituted of acetonitrile: 10 mmol/L-1 TFA, in isocratic mode. Detection and identification were achieved with a diode array detector monitoring wavelength between 195 and 300 nm. The established method was validated through different experimental assays in terms of selectivity, matrix effect (82.4 - 106 %), recovery (84.2 - 98.2 %), residual effect, intra-and interday precision (1.37 - 9.85 and 5.78 - 15.3 %, respectively), accuracy (0.23 - 4.91 %), dilution integrity and robustness (from -19,1 to 7.31 %). Studies of short- (room temperature, 3 days) and long-term (- 6ºC, 30 days) stabilities, processed samples in autosampler (20ºC, 2 days), and freeze-thaw cycles (3 cycles of 12 h) stabilities also were also performed, and the results indicated total integrity of the samples. With a linear range between 0.012 and 5.00 µg/mL-1 and detection and quantification limits of 0.006 and 0.012 µg/mL-1, respectively, the DOFS procedure proved to have a high potential for determining MDMA and MDA in oral fluid, even in less sensitive systems such as liquid chromatography coupled to the diode array detector, outlining a relatively simple and low-cost alternative to the conventional instrumental and sampling techniques within the forensic field