Identificación de aislamientos de Phytophthora cinnamomi asociados aguacate en el sur occidente de Colombia

Phytophthora sp. es un oomycete que en Colombia se encuentra asociado a la pudrición radical en varias de las zonas productoras de aguacate (Persea americana). Phytophthora sp. está presente en el suelo y factores como el nivel freático alto, excesos de humedad y mal drenaje, influencian la presencia del patógeno. Algunos departamentos del sur occidente del país han incrementado las áreas de siembra del cultivo de aguacate y junto a este incremento se han encontrado síntomas de pudriciones, amarillamiento y retraso del crecimiento de los árboles, los cuales están relacionados con el patógeno. Una de las estrategias de manejo para la pudrición radical causada por Phytophthora sp. es la utilización de portainjertos tolerantes, sin embargo, el mecanismo de infección del patógeno resulta complejo, por lo que es necesario conocer su biología y genética a la hora de implementar un método control. En la presente investigación se aislaron e identificaron 45 aislamientos de Phytophthora procedentes de tres departamentos de Colombia. Los aislamientos se obtuvieron de muestras de suelo y raíces de árboles de aguacate sanos y enfermos. Mediante un análisis morfológico a género, con características macroscópicas de las colonias y microscópicas de las estructuras, y molecular a especie, con la utilización de marcadores moleculares (secuencias de la región interna transcripta -ITS), se comprobó la identificación de los aislamientos; posteriormente se evaluó la patogenicidad de estos aislamientos con un la metodología de inoculación con micelio en herida al tallo de plantas de aguacate Hass y con una prueba de inoculación artificial en hojas de aguacate. Se obtuvieron 45 aislamientos del orden Oomycetes. Los análisis morfológicos de las colonias indicaron que los aislamientos presentaron dos tipos de crecimiento: 11 aislamientos con colonia tipo estrella y 34 aislamientos con colonia tipo roseta, característica que los identifican como Phytophthora; estos aislamientos presentaron micelio coraloide, hinchazones hifales y esporangios no papilados, a diferencia de las otras (11 aislamientos tipo estrella) que presentaron micelio liso y sin esporangios, por lo cual no se identifican dentro del género Phytophthora. Con las regiones ITS 1 y 4 se comprobó que los 34 aislamientos de Phytophthora pertenecen a la especie P. cinnamomi. Con la metodología de inoculación por herida al tallo, se evidenció que los 34 aislamientos de P. cinnamomi fueron capaces de producir necrosamiento en plantas de aguacate Hass. De acuerdo con los análisis estadísticos, los aislamientos más patogénicos fueron Tamb-09, Cajib-37 y Dag-65. El aislamiento Tamb-09 se destacó como el más agresivo con diferencia estadística significativa (P 0.05), mientras que el aislamiento Per-128 fue menos agresivo, ya que no produjo necrosamiento en el tallo. La prueba de inoculación artificial en discos de hojas permitió obtener una suspensión de zoosporas móviles y una leve lesión en los discos inoculados con el aislamiento más patogénico Tamb-09; aunque no se generaron suficientes síntomas de necrosamientos en todos los discos de hojas, este ensayo preliminar genera bases para continuar con una metodología alterna para producir inoculaciones. Estos resultados confirman la presencia de Phytophthora cinnamomi en cultivos comerciales de aguacate de los departamentos del Cauca, Valle del Cauca y Risaralda; además, la colección de aislamientos patogénicos se constituye en un potencial para establecer ensayos de tolerancia en materiales de aguacate utilizados como portainjertos.//Abstract: Phytophthora sp.is an oomycete that in Colombia is associated with root rot in several of the avocado producing areas (Persea americana). Phytophthora sp. is present in the soil and factors such as the high phreatic level, excess moisture and poor drainage influence the presence of the pathogen. Some departments of the south west of the country have increased the planting areas of the avocado crop and along with this increase have been found symptoms of decay, yellowing and retardation of the growth of the trees, which are related to the pathogen. One of the management strategies for root rot caused by Phytophthora sp. is the use of tolerant rootstocks, however, the mechanism of infection of the pathogen is complex, so it is necessary to know their biology and genetics when implementing a control method. In the present investigation, 45 isolates of Phytophthora from three departments of Colombia were isolated and identified. Isolates were obtained from soil and roots samples from healthy and diseased avocado trees. By means of a morphological analysis to gender, with macroscopic characteristics of the colonies and microscopic of the structures, and molecular to species, with the use of molecular markers (sequences of the internal region transcripta -ITS), the identification of the isolates was proved; subsequently the pathogenicity of these isolates was evaluated with a methodology of inoculation with mycelium in wound to the stalk of Hass avocado plants and with a test of artificial inoculation in avocado leaves. We obtained 45 isolates of the order Oomycetes. The morphological analyzes of the colonies indicated that the isolates presented two types of growth: 11 isolates with star-type colony and 34 isolates with rosette-type colony, a characteristic that identifies them as Phytophthora; these isolates presented coraloide mycelium, hyphal swellings and nonpapillated sporangia, unlike the others (11 star type isolations) that presented smooth mycelium and without sporangia, therefore they are not identified within the genus Phytophthora. With regions ITS 1 and 4 it was found that the 34 Phytophthora isolates belong to the species P. cinnamomi. With the methodology of inoculation by wound to the stem, it was evidenced that the 34 isolations of P. cinnamomi were capable of producing necrosis in Hass avocado plants. According to the statistical analyzes, the most pathogenic isolates were Tamb-09, Cajib-37 and Dag-65. The Tamb-09 isolation stood out as the most aggressive with significant statistical difference (P 0.05), whereas the Per-128 isolation was less aggressive, since it did not produce necrosis in the stem. The artificial inoculation test in leaf discs allowed obtaining a suspension of mobile zoospores and a slight lesion in the discs inoculated with the most pathogenic isolation Tamb-09; although sufficient symptoms of necroses were not generated in all leaf discs, this preliminary test generates bases to continue with an alternative methodology to produce inoculations. These results confirm the presence of Phytophthora cinnamomi in commercial avocado cultivation in the departments of Cauca, Valle del Cauca and Risaralda; In addition, the collection of pathogenic isolates constitute a potential to establish tolerance tests on avocado materials used as rootstocks.Maestrí