Impacto del volumen del fagosoma en los niveles de ARNm de IL-12 en infección por Leishmania amazonensis

La interacción entre macrófago y patógeno es la responsable de modular la respuesta adaptativa mediada por linfocitos T como células efectoras. En la infección por Leishmania se ha establecido una clara relación entre la secreción de citoquinas pro inflamatorias con la posterior activación de linfocitos T con fenotipo Th1, indicativo de protección a la infección, mientras que la liberación de citoquinas anti inflamatorias se ha asociado con polarización de la respuesta inmune hacia fenotipo Th2, que sugiere exacerbación de la infección. Teniendo en cuenta que en esta infección hay una polarización Th2, se quiso abordar el estudio de la interacción Macrófago - Leishmania desde una perspectiva celular. En esa medida, se buscó evidencia de alteraciones en la expresión génica de IL-12 relacionado con el volumen de la vacuola parasitófora, incluyendo activación de macrófagos y fagocitosis de perlas de látex que generan un fagosoma de tamaño similar al de la infección por Leishmania amazonensis en macrófagos J774A.1. La expresión del gen se midió por medio de RTqPCR, y de la proteína por Western Blot e Inmunofluorescencia indirecta, evidenciando que no hay expresión de este gen en este modelo en forma constitutiva, que la activación del macrófago induce niveles bajos de proteína en tiempos distintos a la ventana de tiempo estudiada como se había postulado y por tanto no es posible valorar el impacto de la fagocitosis de material inerte y la infección por Leishmania amazonensis sobre los niveles de IL-12 en el modelo usado en este estudio.Abstract. The interaction between macrophage and pathogen is responsible for modulating the adaptive response mediated by T lymphocytes as effector cells. In Leishmania infection it is established a definite correlation between the secretions of pro-inflammatory cytokines with subsequent activation of T lymphocytes to the Th1 phenotype, indicative of protection to infection, whereas anti-inflammatory cytokine release has been associated with the polarization of the immune response towards Th2 phenotype, suggesting exacerbation of infection. Given that this infection is a bias towards Th2 phenotype, this study aimed at the interaction macrophage-Leishmania from a cellular perspective, to that extent, the purpose was to obtain evidence to suggest an alteration in IL-12 gene expression related to the volume of the parasitophorous vacuole, including macrophage activation and phagocytosis of latex beads which produce a phagosome similar to infection by Leishmania amazonensis size. The expression the gen was measured by RTqPCR, and protein level by indirect immunofluorescence and Western blotting, showing that there is not gen but marginal level of protein expression in J774A.1 macrophages in the time window studied and therefore the impact of inert material in phagocytosis and Leishmania amazonensis infection on IL-12 levels in the experimental model used was not possible.Maestrí