Validation of micellar electrokinetic chromatography method for determination of febuxostat and its impurities in pharmaceutical formulation

Validacija analitičke metode je proces kojim se određuje i dokumentira prikladnost analitičke metode za određenu primjenu. Osnovni parametri koji se uzimaju u obzir tijekom validacije su: točnost, preciznost, specifičnost/selektivnost, granica dokazivanja, granica određivanja, linearnost i koncentracijsko područje i izdržljivost. Cilj ovoga rada bio je ispitati validacijske parametre za novorazvijenu analitičku metodu i utvrditi njezinu prikladnost za istovremeno određivanje febuksostata i njegova tri onečišćenja, febuksostat amida, febuksostat DEE i etil-febuksostata, u gotovom ljekovitom obliku. Febuksostat je inhibitor ksantin oksidaze, lijek koji se koristi u liječenju kronične hiperuricemije. Korištena je micelarna elektrokinetička kromatografija, separacijska tehnika koja ima sposobnost odvajanja neutralnih i nabijenih analita. Kod validacije analitičke metode ispitana je linearnost metode te preciznost metode izražena kao ponovljivost. Metoda je linearna za febuksostat amid i febuksostat DEE u području koncentracija od 0,1 do 10,0 μg/mL, dok je za etil febuksostat linearna u rasponu koncentracija od 0,1 do 5,0 μg/mL. Za febuksostat metoda je linearna u području koncentracija od 100,0 do 1200,0 μg/mL. Preciznost metode je određena kao ponovljivost. Izražene su relativna standardna odstupanja za korigirano vrijeme migracije i korigiranu površinu pikova analita. Dobivene RSD vrijednosti za vrijeme migracije iznosile su između 0,84-1,37 %, a za površinu pika 1,00-2,85 %. Očekivano, najveća odstupanja dobivena su za pik onečišćenja etil febuksostata koji je nepolarno onečišćenje i najviše stupa u interakcije s micelama natrijevog dodecil sulfata, koji migrira zadnji od svih analita i ujedno je pik s najlošijom simetrijom. Rezultati ukazuju na to da je preciznost predložene micelarne elektrokinetičke kromatografske metode zadovoljavajuća.Validation of analytical method is a process used to confirm that the analytical procedure employed for a specific test is suitable for its intended use. Typical validation characteristic which should be considered are: accuracy, precision, specificity, limit of detection, limit of quantitation, linearity, range and robustness. The objective was method validation for simultaneous determination of febuxostat and its impurities, febuxostat amide, febuxostat DEE and ethyl febuxostat in pharmaceutical formulations. Febuxostat is a xanthine oxidase inhibitor, the new drug used in chronic hyperuricemia treatment. In this paper the method for determination of febuxostat and its impurities was validated. The technique used for determination was micellar electrokinetic chromatography. Parameters tested for validation were linearity and intermediate precision. Method is linear for febuxostat amid and febuxostat DEE in concentration range from 0.1 to 10.0 μg/mL, and for ethyl febuxostat in range from 0.1 to 5.0 μg/mL. For febuxostat linearity is in range from 100.0 – 1200.0 μg/mL. Method precision is demonstrated as repeatability. Relative standard deviation for migration time and peak areas were presented. RSD values for migration time were from 0.84 to 1.37 % and for peak areas were from 1.00 to 2.85 %. Greatest aberrations were for peak areas for ethyl febuxostat. Ethyl febuxostat is a neutral impurity that interacts most with the inner capillary wall so its peaks have bad symmetry. Results suggest that the precision of the proposed method is satisfactory