Characterizing the role of prolactin-induced tyrosine phosphorylation of Grb2 in the regulation of epidermal growth factor signalling in mammary epithelial and breast cancer cells

Multiple hormones and growth factors regulate mammary epithelial and breast cancer cell growth and differentiation. While prolactin (PRL) is a differentiation hormone, epidermal growth factor (EGF) is an important mitogen. Here we examined the PRL and EGF crosstalk mechanism in mammary epithelial cells. Our results indicate that PRL and EGF exhibit antagonistic properties that impacts mammary epithelial cell proliferation and differentiation. While EGF blocked PRL-induced cellular differentiation, PRL suppressed EGF-induced cell growth. EGF was shown to block PRL-induced cellular differentiation without inhibiting PRL proximal signaling cascade such as Jak2 and Stat5a tyrosine phosphorylation. We identified Grb2 as a novel substrate of the PRLR/Jak2 complex. Moreover, the tyrosine phosphorylation of Grb2 was shown to be an essential mechanism utilized by PRL to inhibit EGF signals to MAPK activation and cell growth. Together these results define a novel signaling mechanism underlying PRL and EGF crosstalk in mammary epithelial and breast cancer cell growth and differentiation.La PRoLactine (PRL) et Epidermal Growth Factor (EGF) sont des facteurs importants pour la croissance cellulaire, la différenciation et la carcinogenèse mammaire. Tandis qu'EGF est un mitogène puissant, PRL est critique pour l'induction de la différenciation de cellules épithéliales mammaires. Tandis qu'EGF bloque la différenciation cellulaire causée par PRL, PRL supresse la croissance cellulaire dûe à EGF. D'un côté, on a montré qu'EGF bloque la différenciation cellulaire sans inhiber la signalisation proximale de PRL. De l'autre, le traitement avec PRL inhibe l'activation de MAP Kinases par EGF et la prolifération cellulaire. De plus, le traitement avec PRL entraîne une augmentation significative de la phosphorylation en ou sur les tyrosines de Grb2. Pour confirmer ces résultats, nous avons utilisé Grb2YF, une forme de Grb2 sans sites de phosphorylations de tyrosines. En présence de PRL et Grb2YF, nous avons observé un rétablissement de l'activation de Ras et des MAP Kinases. Nos données suggèrent que la PRL réduit l'activation des MAP Kinases et la prolifération cellulaire induite par EGF grâce à la phosphorylation des sites tyrosines de Grb2 empêchant ainsi l'interaction avec Sos. Ensemble ces résultants définissent un nouveau mécanisme de signalisation qui met en évidence la communication entre PRL et EGF dans la croissance et différenciation des cellules épithéliales mammaires et cancérigènes