Arrangement of human erythrocyte membrane proteins.

The orientation of human erythrocyte membrane proteins was examined using the following techniques: i. lactoperoxidase-catalyzed iodination of the external surface with l25I and the cytoplasmic surface with 131I followed by proteolytic digestion of either the external surface (resealed ghosts) or cytoplasmic surface (inside-out vesicles), ii. phosphorylation of inside-out vesicles with alpha-32P-ATP in conjunction with alkaline phosphatase treatment; and iii. phospholipase C treatment of intact cells followed by enzymic iodination. Protein analysis by SDS polyacrylamide gel electrophoresis revealed several peaks of radioactivity whose orientation was as follows: i. a ~100,000 molecular weight component spanning the membrane asymmetrically; ii. the major glycoprotein (apparent molecular weight 60,000-70,000) accessible at the external surface; iii. ~200.000 molecular weight components accessible to probes at the cytoplasmic surface; iv. a minor glycoprotein (apparent molecular weight 25,000) accessible at both surfaces; and v. minor components of 60,000-70,000, 45,000, and 20,000 molecular weight accessible at the cytoplasmic surface. Phospholipase treatment of intact cells markedly reduced accessibility of proteins to iodination at the external surface, this was partially reversed by pancreatic lipase treatment.L'orientation des protéines de la membrane, erythrocytaire humaine a été examinée par les techniques suivantes: i. iodination catalysée par la lactoperoxidase de la surface externe avec 125I et de la surface cytoplasmique avec 131I suivie par digestion protéolytique soi de la surface externe (membranes scellées) ou de la surface cytoplasmique (vésicules inversées); ii. phosphorylisation des vésicules inversées avec alpha-32P-ATP en conjonction avec un traitement avec la phosphatase alcaline; iii. traitement des cellules intactes avec phospholipase C suivie par l'iodination enzymatique. Analyse des protéines par l'electrophorèse sur gels de SDS-polyacrylamide a révélé plusieurs pics radioactifs dont l'orientation était comme suit: i. une composante de poids moleculaire de ca. 100,000 traversant la membrane d'une façon asymetrique; ii. la glycoprotéine majeure (poids moleculaire apparent de 60,000-70,000) accessible à la surface externe; iii. une composante de poids moleculaire de ca. 200.000 accessible aux sondes à la surface cytoplasmique, iv. une glycoprotéine mineure (poids moleculaire apparent de 25,000) accessible aux deux surfaces, et v. composantes mineures de poids moleculaire de 60,000-70,000, 45,000, et, 20,000 accessible à la surface cytoplasmique. Digestion des cellules intactes avec la phospholipase C a marquablement réduit l'accesibilité des protéines à l'iodinat1on à la surface externe; ceci a été partiellement renversé par un traitment avec la lipase pancréatique