Transport activity and Na+-K+-ATPase of plasma membranes of Ehrlich ascites cells.

A new procedure has been developed for the rapid, large scale isolation of plasma membranes from Ehrlich ascites cells which is superior to other available methods. The surface charge density of these membranes (60,000 esu cm^-2) is 20 times the value reported for intact cells using different methodology. The Na+-K+-ATPase of these membranes has a low turnover number (2000 min^-1) and a high sensitivity to K+ at low [ATP]. Evidence is presented for the existence of an ATP-generating system in the membranes maintaining a steady state level of ATP of about 50 pmoles mg^-1. In the absence of ion gradients, 2-aminoisobutyric acid (AIB) is accumulated in the membrane vesicles. The vesicular ATP is a potential candidate for energizing this active transport. Ion gradients increased AIB accumulation through specific coupling to the Na+ electrochemical potential difference across the vesicle membrane. Other cations are not required per se. Exchange diffusion was demonstrated using methionine.Une nouvelle méthode pour l'isolement de la membrane plasmatique de la cellule Ehrlich ascitique a été développée. Celle-ci est supérieure aux méthodes conventionelles. La densité de charges négatives sur les membranes est de 60,000 esu cm^-2; cette valeur est 20 fois celle mesurée dans les cellules intactes avec des techniques différentes. L'activité Na+-K+-ATPasique de ces membranes a un faible taux de "turnover" (2000 min^-1) et une sensibilite éleveé à K+ à de basses concentrations d'ATP. Des preuves sont présentées pour l'existence dans les membranes d'un système qui produit l'ATP et le maintient à un niveau d'environ 50 pmoles mg^-1. En l'abscence de gradients d'ions, l'acide 2-aminoisobutyrique (AIB) est accumulé dans les vésicules que forment les membranes. L'ATP qui se trouve associé à ces membranes peut fournir l'énergie requise pour l'accumulation. Les gradients d'ions augmentent l'accumulation de l'AIB par couplage spécifique à la différence de potentiel électrochimique du Na+ à travers la membrane de la vésicule. D'autres cations ne sont pas requis. L'échange est démontré en utilisant la méthionine