Praeparation und Analytik von Cellooligosacchariden und kinetische Untersuchung ihrer Hydrolyse durch Cellobiohydrolase I und II

Die Saeurehydrolyse von Cellulose wird bezueglich der Ausbeute von Cellooligosacchariden mit Polymerisationsgraden von 3 bis 10 optimiert (rauchende Salzsaeure, 1 Stunde bei Raumtemperatur, Reinigung von der Saeure und Mono- und Disacchariden durch Dialyse und ueber Anionenaustausch, Auftrennung durch Ausschlusschromatographie, erzielte Reinheit mindestens 95%). Die analytische Bestimmung erfolgt durch HPLC an silberbeladenem AMINEX HPX 42A Kationenaustauscher und nachgeschalteter Umsetzung mit Kupfer/Natriumbicinchoninat bzw. Orcin/Schwefelsaeure ('chemical reaction detection'). Fuer die Hydrolyse der Cellooligosaccharide wurden Konzentrations-Zeitverlaeufe aufgezeichnet, fuer den Abbau mit der Hydrase I wurde die Michaelis-Konstanten und die maximalen Reaktionsgeschwindigkeiten bestimmt. Die Ergebnisse werden hinsichtlich des Abbaumechanismus diskutiert. (orig.)Cellooligosaccharides (DP 3 to 10) were prepared by cellulose hydrolysis using concentrated hydrochloric acid. Optimum hydrolysis time was 1 h at room temperature. Acid was removed by partial dialysis followed by anion exchange, the cellooligosaccharide mixture was separated into individual components by size exclusion chromatography on Biogel P4. The obtained cellooligosaccharides had a purity of at least 95%. Analytical determination of cellooligosaccharides was achieved by a HPLC system using two AMINEX HPX 42A columns with water as mobile phase combined with a chemical reaction detection unit. CU"2"+/bicinchoninate or orcinol/H_2SO_4 were used as reagents, a knitted teflon capillary served as reactor. The hydrolysis time-courses of cellooligosaccarides (DP 2 to 9) by cellobiohydrolases (CBH) I and II from Trichoderma reesei were studied in concentration ranges from 1 to 100 #mu#mol/l and, for CBH I, K_M and V_m_a_x values were obtained. The data correspond to a model consisting of the release of cellobiose or cellotriose by the first hydrolytic cleavage followed by sequential release of cellobiose. (orig.)SIGLEAvailable from TIB Hannover: DW 3725 / FIZ - Fachinformationszzentrum Karlsruhe / TIB - Technische InformationsbibliothekDEGerman